G96310064六页稿-东海大学化学工程与材料工程学系.DOCVIP

Nafion?/尿素酵素/中孔碳/聚苯胺-Nafion?/Au/Al2O3尿素生化感測器之製備與性質及其應用於汞離子之感測 研究生: 張良源 指導教授：杜景順 指導教授簽名：___________ 日期：_______ 1.緒論 由於生化科技與醫療品質在近幾年來大幅的改善，對於人體健康與疾病的監控是除了環保之外另一個生活品質的重要課題，其中，在人體疾病方面，近年來罹患腎功能障礙者正逐年增加，並成為台灣地區國人10大死亡疾病之一。 一般檢測腎臟功能可以從血液或尿液中的尿素(尿素在血液中之正常濃度為1.7～8.3 mM)[1]，但是對於急性腎功能障礙者，血液中含尿素濃度更高達120～150 mM[2]。因此血液中尿素之定量對於腎臟病變的監測是一項重要的指標。 生化感測器是將生化分子(酵素、蛋白質、微生物、抗體或抗原)固定於薄膜材料上，並與待測物質進行反應，藉由轉換器(transducer)將生化反應所產生之變化轉化成為可被儀器測量的訊號。 尿素酵素感測器是利用尿素酵素將尿素轉化成NH4+與碳酸氫根離子(HCO3-)，再利用光學法或是電化學法感測NH4+濃度，間接獲知檢體中尿素的濃度。尿素在尿素酵素作用下的水解反應如下式1[3,4]: (1) 因此將尿素酵素固定在NH4+感測電極表面即可用以感測尿素。 傳統上在環境檢測重金屬污染的方法中，大都是原子吸收光譜(AA)[5]與感應電藕合電漿質譜儀(ICP)[6]等方法，此類的感測技術一般具有靈敏度高，準確佳的特性，但存在著樣品前處理較為複雜、儀器價格昂貴與需要專業人員進行操作等缺點[7]。 電化學法在環境重金屬離子之檢驗中，除了能夠快速得到感測結果之外，一般還具有攜帶方便、容易操作等優點[8]，利用尿素生化感測器來感測重金屬離子，其感測原理是利用重金屬離子與尿素酵素的硫氫基(sulphydryl groups)結合,使尿素酵素的硫氫基無法與尿素的胺基(-NH2)產生催化反應，進而降低酵素的催化能力。其反應如下[9]: (2) 近年來具有結構一致性，且孔徑介於2-50 nm的中孔碳材(mesoporous carbon)的研究相當多，所合成出的中孔碳材除了具有結構一致性外，還擁有高表面積以及孔洞體積，因此引起相當大的重視[10]。此外中孔碳作為酵素之載體(support)，利用其所具有的中孔孔徑孔洞與高表面基特性，將酵素固定於中孔碳材中的孔洞中，並應用於生化感測器上的研究，也在近年來陸續被提出。此類研究主要是利用物理限制(physical confinement)的方式，將酵素置於此中孔碳材的孔洞內部空間中，因此可以減少酵素外漏情形，並達到酵素穩定化的效果。 2.實驗方法 2.1中孔碳之製備 在製備中孔碳過程中，主要以TEOS為矽源，而碳源與孔洞劑分別為蔗糖與磷酸；在上述三者混合均勻後，以管狀高溫爐進行煅燒，並於過程中通以氮氣，使碳源能碳化與燒結，形成矽/碳之奈米複合材料，並除去孔洞劑(磷酸)。接著浸泡氫氟酸以去除矽/碳奈米複合材料之氧化矽。以去離子水抽氣過濾清洗，最後重複除矽步驟程序一次，在將其置入球磨機球磨，完成中孔碳之製備[11] 2.2聚苯胺-Nafion?複合膜電極之製備 以濺鍍法濺鍍黃金於陶瓷基材上，再澆鑄8μl 1w% Nafion?(Aldrich, 5wt%)溶液於黃金電極表面，於室溫下陰乾。以鹽酸為質子酸，配置0.1M苯胺溶液(Merck, ＞99%)，以計時電位法於5°C氮氣環境下製備聚苯胺於Nafion?/Au/Al2O3上，完成聚苯胺-Nafion?複 合膜/Au/Al2O3電極製備。 2.3中孔碳/複合膜電極與酵素電極之製備 澆鑄20μl中孔碳溶液於聚苯胺-Nafion?複合膜上，於4°C下陰乾6小時，接著分別澆鑄4μl尿素酵素與4μl 1wt% Nafion?溶液於中孔碳/聚苯胺-Nafion?/Au/Al2O3工作電極表面，並於4°C下陰乾2小時，完成Nafion?/尿素酵素/中孔碳/聚苯胺-Nafion? /Au/Al2O3電極，未使用之酵素電極保存於磷酸鹽緩衝溶液中。中孔碳/複合膜電極製備方法與上述方法類似，唯獨減少酵素添加的步驟。 2.4 感測裝置 以K2HPO4與KH2PO4配製0.05M磷酸鹽緩衝溶液，分別配置NH4Cl、尿素與HgCl2(ACROS, ≧99.5%)溶液，利用三電極式感測裝置，其中相對電極與參考電極分別為白金線與Ag/AgCl/3M NaCl(aq.)，以循環伏安法進行感測，掃描電位範圍為-0.5~0.5V，掃描速率50mV s-1 2.5 中孔碳酸處理修飾 量取濃硫酸與濃硝酸以體積比3比1配製混合酸液，接著加入前述製備完成之中孔碳材於