聚乙二醇对溶菌酶淀粉样纤维形成的作用.docxVIP

聚乙二醇对溶菌酶淀粉样纤维形成的作 张帅洲曾成鸣 陕西师范大学化学化工学院 摘要： 目的探索在聚乙二醇（PEG）存在的条件下，溶菌酶淀粉样纤维化及由此生成 的聚集体对细胞的毒性作用。方法溶菌酶溶液中分别加入不同相对分子质量的 PEG,在pH值为2.0、55°C的条件下孵育。采用硫黄素荧光监测溶菌酶淀粉样纤 维化，透射电子显微镜观察聚集体形态，以诱导人红细胞聚集和溶血为指标评 估溶菌酶聚集体对细胞膜的损害作用。结果在实验条件下，溶菌酶可形成淀粉 样纤维，所有PEG均能够抑制溶菌酶的淀粉样纤维化，改变溶菌酶聚集体的形 态，降低聚集体的表而疏水性和聚集体对细胞的损害作用。结论PEG能够抑制 溶菌酶的淀粉样纤维化，并使溶菌酶聚集体的细胞毒性减弱。 关键词： 聚乙二醇;溶菌酶;淀粉样纤维化;细胞毒性;红细胞; 作者简介：张帅洲，男，硕士研究生 作者简介：曾成鸣，男，博士，教授，博士生导师 收稿日期：2017-02-15 Effects of polyethylene glycol on amyloid fibrillation of lysozyme ZHANG Shuaizhou ZENG Chengming School of Chemistry and Chemical Engineering, Shaanxi Normal University; Abstract： Objective To investigate amyloid fibrillation and fibrillar cytotoxicity of lysozyme in the presence of polyethylene glycols (PEG) . Methods PEG was mixed with lysozyme prior to incubation at pH 2. 0 and 55°C. The growth curve of 1 ysozyme fibril was monitored by thioflavin T fluorescence, and morphology of lysozyme aggregates was visualized undor tremsmission electron microscopy. The cytotoxicity of lysozyme aggregates was evaluated by measuring hemolysis and aggregation of human red blood cells. Results Incubation of lysozyme under the condition of this study resulted in the formation of amyloid fibri1s. Al 1 the PEGs tested herein were able to inhibit lysozyme fibrillation， and alter the morphology lysozyme aggregates. Upon incubation with PEG, the surface hydrophobicity and cytotoxicity of resultant aggregates of the protein were decreased. Con elusion PEG is able to inhibit amyloid forma tion of lysozyme, and decrease cytotoxicity of the resultant aggregates. Keyword： polyethylene glycol; lysozyme; amyloid fibrillation; cytotoxicity; red blood cells; Received： 2017-02-15 蛋白质淀粉样变性以及由此引发的多种人类疾病日益受到关注，现已知20多种 人类疾病与蛋白质因错误折叠形成淀粉样纤维相关II丄。这些由蛋白质形成的淀 粉样纤维沉积于细胞膜，造成细胞损害，最终导致细胞凋亡［2-3］。减少相关蛋 白表达，增加其稳定性，抑制纤维化，解聚淀粉样纤维结构是探索相关疾病治 疗方法的重要途径。亲水性聚合物，包括聚乙二醇（polyethylene glycol, PEG）、右旋糖酹及白蛋白等，可提供增加蛋白稳定性的物理化学环境。经PEG 修饰过的药物蛋白不仅可以维持药物的生物活性，还可以降低药物蛋白的免疫 性和毒性￡￡。 溶菌酶是一种相对分子质量较小的碱性蛋白，在一定条件下可形成淀粉样沉积， 人类遗传性系统