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宁夏医科大学学位论文独创性声明
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论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日
宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要
宁夏医科大学硕士研究生学位论文
中文摘要
海马低频电刺激对 KA 点燃大鼠 GABAA 受体 α1 和 β2 亚基
表达的影响
摘 要
目的 研究海马低频电刺激(LFS)对海人酸致痫大鼠海马突触内 GABAA 受体 α1 和 β2 亚 基表达的影响,了解 LFS 对难治性癫痫的治疗机制。
材料和方法 6-8 周龄雄性 SD 大鼠,由宁夏医科大学实验动物中心提供,体重 250~280g, 单笼饲养,昼夜循环。按随机数字表法分为癫痫组、假手术组、治疗组和空白对照组, 每组 n=10 只:(1)癫痫组:立体定向下将海人酸(KA)注射至左侧海马 CA3 区(坐标: 前囟后 5.0mm,旁开 4.8mm,深度 4.8mm)建立 KA 点燃模型;(2)假手术组:KA 点燃后 只在右侧海马植入电极而不进行 LFS;(3)LFS 治疗组:KA 点燃后在右侧海马植入电极, 通过 A-M SYSTEMS 2100 刺激器进行 LFS。刺激参数为:脉冲双向方波,累计时间 30 分 钟,波宽 lms,强度 100μA,频率 1Hz,每天固定时间刺激 1 次,连续 2 周。(4)空白 对照组不予任何处理。实验开始后观察点燃大鼠行为学表现和监测脑电图;实验结束后, 一部分大鼠断头取脑,剥离出海马组织冻存;另一部分大鼠活体灌注行石蜡包埋。通过 尼氏染色检测大鼠海马神经元损伤情况;通过 RT-PCR 检测海马 α1 和 β2 亚基 mRNA 表 达情况;通过免疫组化和 Western-Blot 检测海马 α1 和 β2 亚基蛋白表达情况。。应用 统计软件进行数据分析。实验数据用均数±标准差( x ??s )表示,数据采用单因素方差 分析,方差齐性检验后组间差异统计学意义比较采用 LSD-t 检验,以 p≤0.05 为差异有 统计学意义。
结果 1.动物模型的行为学表现:注射海人酸后大鼠最初表现为抖须、闭眼、流涎、面肌 痉挛、节律性的咀嚼,随后出现湿狗样抖动、前肢上抬、抽搐随即跌倒,发作剧烈者, 可出现突然跳跃,不停旋转。
2.脑电图: KA 致痫后典型的癫痫波型有单棘波、多相棘波、双相棘波、棘-慢波、 阵发性高幅尖波节律,期间有发作性后抑制,其中以多发棘波为主且频繁出现。
3.尼式染色:癫痫组、假手术组、治疗组海马 CA1 区神经元排列松散、紊乱、缺失
严重,轮廓不清,胞核结构模糊,核仁不明显,甚至消失。空白对照组 CA1 区神经元 细胞形态清晰,排列整齐,胞核结构清晰,胞浆中可见尼式小体,神经元未见异常形态 改变。说明海马 LFS 治疗不能逆转受损伤的神经元。
4. RT-PCR:TRIzol法提取海马组织总RNA,RT-PCR仪分析mRNA表达变化情况。 结果显示α1亚基在癫痫组、假手术组、治疗组和空白对照组中的相对表达倍数为 0.32±0.21、0.35±0.18、3.81±0.33、4.23±0.16;β2亚基为0.49±0.22、0.52±0.25、2.08±0.30、
2.44±0.19。癫痫组、假手术组与治疗组、空白对照组之间α1亚基、β2亚基表达的差异有 统计学意义(p﹤0.01);癫痫组与假手术组(p﹥0.05),及治疗组与空白对照组之间α1 和β2亚基表达的差异无统计学意义(p﹥0.05)。
5.免疫组织化学:神经元胞浆呈棕黄色为阳性。α1 亚基平均吸光密度(IA)值法 在癫痫组、假手术组、治疗组与空白对照组分别表达量:0.09±0.02、0.10±0.02、0.21±0.03、 0.24±0.01;β2 亚基分别为:0.06±0.02、0.07±0.03、0.15±0.02、0.18±0.04。癫痫组、假手
术组与治疗组、空白对照组
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