鳜胃蛋白酶原早期发育表达及两种胃泌素家族基因的克隆与表达-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

上海海 上海海洋大学硕士学位论文 II II 胃蛋白酶原，胃蛋白酶原在胃酸作用下形成活性形式的胃蛋白酶，仔 鱼消化方式由碱性消化转变为消化道内更有效的酸性消化。本研究检 测了鳜孵化后 0-22 天胃蛋白酶样活性大小变化，结果显示酶样活性呈 现较大的波动，在早期（0-8 dph）就有检测到较低水平的活性，而此 时胃腺尚未出现，胃蛋白酶原基因也未表达，这一时期的胃蛋白酶样 活性可能是由母源性的胃蛋白酶或其它天冬氨酸蛋白酶所致。8 dph 后 胃蛋白酶样活性迅速上升，这与胃蛋白酶原 mRNA 水平的表达特征一 致。 胃蛋白酶分泌受多种胃肠激素影响，胃泌素（gastrin, GAS）与胆 囊收缩素（cholecystokinin, CCK）对胃蛋白酶原分泌都有一定的调控 作用，GAS 主要刺激胃酸分泌，CCK 主要促进胆囊排空及胰液分泌， 鱼类中尚缺乏 GAS、CCK 的功能系统研究。论文采用 RACE 技术克隆 了鳜胃泌素与胆囊收缩素基因 cDNA 序列，GAS 基因 cDNA 全长 581bp，5’非翻译区 100 bp，3’非翻译区 145 bp，开放阅读框 336bp， 编码 111 个氨基酸；CCK 具有 2 种类型：CCK1 与 CCK2，CCK1 cDNA 全长为 843bp，5’非翻译区 60 bp，3’非翻译区 369 bp，开放阅读框 414bp， 编码 137 个氨基酸；CCK2 cDNA 全长 846bp，5’非翻译区 112bp，3’ 非翻译区 332bp，开放阅读框 403bp，编码 134 个氨基酸。GAS 与 CCK 成熟肽 C 末端具有相似的八肽结构（DYQGWVDF/DYLGWMDF）， 仅在 C 末端第 3 位和第 6 位氨基酸发生替换。荧光定量 PCR 分析表明， GAS mRNA 主要表达于肠和幽门垂，CCK1 与 CCK2 mRNA 在脑中表 III III 达量最高，在肠和幽门垂也有较高表达，表明 GAS 与 CCK 同为消化 调控因子，而 CCK 还是重要神经分泌因子。GAS 与 CCK mRNA 表达 贯穿于鳜整个幼体早期发育阶段（孵化后 0-22 天），前期表达水平较 高，后期表达水平较低，并趋于平稳，GAS 与 CCK mRNA 发育表达 水平变化可能与这一时期消化道生长发育旺盛有关。 关键词：鳜；胃蛋白酶原；胃蛋白酶；胃泌素；胆囊收缩素；cDNA； 发育表达；组织表达 PAGE PAGE VI Larval developmental expression of pepsinogens, cloning and expression of two gastrin family genes in the mandarin fish (Siniperca chuatsi) Abstract Pepsinogen is the precursor of pepsin, which can be activated in the condition of gastric acid. The full length cDNAs of three kinds of pepsinogen genes, PG A1, PG A2 and PG C were obtained in our previous work. To further understand the the expression patterns of these pepsinogen genes, pepsinogens mRNA expression levels during early developmental stage (0-22 (days post hatching, dph) were analyzed by real time PCR. The result showed expression of three pepsinogen genes started from 8 dph, then in a rising tendency. PG A1 and PG A2 had similar expression levels during 0-19 dph, PG C was the lowest. During 16-22 dph, the expression of PG A2 was stable. Pepsinogen gene levels emerged before 13 dph were probably expressed by other tissues before gastric gland, otherwise the gastric gland cells may