十二指肠钩虫美洲钩虫及犬钩虫虫体蛋白氨基酸的测定.PDF

—357. — 1716. — concentration.Br.Vet.J.132(5):445464. Pennington JA et al.1976gnarcyPrediagnosiswith unextracted J.Anim.Sci.42(5):1361. in-milk test.Br.Vet.J.132(5):538—542. Chung YC 1980 Early pregnancy rapid radioimmunoassay.J.Agric.Sci.81:151. 十二指肠钩虫、美洲钩虫及犬钩虫 虫体蛋白氨基酸的测定 张秀芳 陈亚伟 李明惠 (四川省寄生虫病防治研究所) 寄生于人体的十二指肠钩虫 幼虫、成虫的形态，致病力，在宿主体内的移行规律及对药物的敏感性等均不相 同，表明虫种间存在着差异。犬钩虫(Ancylostoma c 般说对犬钩虫有效的药物，对十二指肠钩虫也有效，而对美洲钩虫则不一定有效。因此，有 必要将三种钩虫的某些生物化学上的差异作一比较。本文用氨基酸自动分析仪测定三种钩虫 虫体蛋白氨基酸的组成及含量，了解其差异，以便为药物治疗、体外培养、生理、生化及免疫 等研究提供有关资料。 12 材料与方法 一、样品制备 从人工感染的幼犬肠腔取出三种钩虫成虫，用生理盐水洗涤三次，选完整虫体分别雌雄 置于盛有生理盐水的培养皿内，培养12～24小时，待虫体内血红蛋白及代谢产物自行排除 后，再挑出虫体，用滤纸吸去虫体体表水份，置于80℃烘箱内8小时，取出后放于干燥器中， 在室温下冷却，研成粉末备用。 二、三种钩虫蛋白氨基酸组成的测定 (一)虫体蛋白的水解 精确称取5mg虫粉放入水解管内，加入6N HCI 6ml，浸泡24小时，于丙酮干冰浴中冰 冻除去气泡，真空条件下封管。置于110℃烘箱中水解24小时，取出冷却后过滤于石英坩埚 内，再于80℃水浴上蒸发至干涸，加0.01N NaOH 1 ml，在空气中放置4小时，待半胱氨酸 转化为胱氨酸，再加0.1N HCI 1 ml，最后加0.01N HCI 3 ml，总量为5ml，此为原液，加 缓冲液稀释25或50倍待测。 (二)测定 用日立835型氨基酸自动分析仪测定三种钩虫蛋白氨基酸，并由电子计算机自动计算其 含量。 (由中国科学院成都生物研究所协助测定) 结 果 三种钩虫蛋白氨基酸组成测定结果： (一)三种钩虫无论雌雄虫都具有18种相同的氨基酸，就其定性而言，种间及两性间无 差异。 1．羟脯氨基酸(Hgpro) 2．门冬氨酸(Asp) 3．苏氨酸(Thr) 4．丝氨酸(Ser) 5．谷氨酸(Glu) 6．脯氨酸(Pro) 7．甘氨酸(Gly) 8．丙氨酸(Ala) 9．胱氨酸(Cys) 10．缬氨酸(Val) 11．甲硫氨酸(Met) 12．异亮氨酸(Ile) 13．亮氨酸(Len) 14．酪氨酸(Tyr) 15．苯丙氨酸(Phe) 16．赖氨酸(Lys) 17．色氨酸(Trp) 18．精氨酸(Arg) (二)三种钩虫的雄虫和雌虫及同种钩虫两性间17种氨基酸的含量分布比较如下： 1.不同虫种氨基酸含量分布 雄虫： (Gly、Glu、Asp、Pro)略低于十二指肠钩虫，其余基本一致。 美洲钩虫各种氨基酸含量分布均低于另两种钩虫。 13