果蔬灰霉病菌对两种呼吸抑制剂的抗药性研究-森林保护学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 独 创 性 声 明 本人声明，所呈交的学位论文，是受国家自然科学基金“灰霉病菌啶酰菌胺抗药性突变 体对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂表现负交互抗药性的机制”和公益性行业(农业) 科研专项“农作物重要病原菌抗药性监测及治理技术研究与示范”（201303023）资助，在指 导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标 注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包 含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出 贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的 行为，由本人承担应有的责任。 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 论文使用授权的说明 本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复 印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。□ 不保密, 本学位论文属于不保密。 □ （请在方框内打“√”） 学位论文作者亲笔签名： 日 期： 指导教师亲笔签名： 日 期： 摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘要 灰霉病是一种全球性真菌病害，主要由灰葡萄孢 Botrytis cinerea 引起。目前 甲氧基丙烯酸酯类（QoIs）和琥珀酸脱氢酶抑制剂（SDHIs）两类现代呼吸抑制 剂是生产上用于防治灰霉病菌的重要药剂。 本研究采用菌丝生长速率法，连续监测了 2010-2012 年间浙江省果蔬灰霉病 菌对 QoI 类杀菌剂嘧菌酯的敏感性变化。结果表明：病菌群体中的低敏感性亚群 体的比例明显上升，EC50 值＞5 mg/L 菌株的比例分别为 12.5%、15.8%和 28.3%； 旁路氧化在灰霉病菌菌丝生长阶段和孢子萌发阶段对嘧菌酯敏感性的平均相对 贡献值（F）分别为 2.91±0.89 和 5.72±2.82；嘧菌酯抗药性菌株的菌丝生长速率、 产孢量、产菌核数和致病力与敏感菌株相比无显著差异。分子机制研究表明，灰 霉病菌中存在两种类型的 cyt b 基因：I 型 cyt b 基因在第 143 位密码子后紧跟内 含子；II 型 cyt b 基因在第 143 位密码子后没有紧跟内含子。大多数的灰霉病菌 菌株属于 II 型。I 型菌株均为嘧菌酯敏感菌株， II 型菌株为嘧菌酯敏感菌株或 抗性菌株。抗药性机制为 G143A。 分别采用菌丝生长速率法和区分剂量法连续监测了 2012-2013 年间浙江省和 省外果蔬灰霉病菌对 SDHIs 类杀菌剂啶酰菌胺的敏感性变化，结果表明 2013 年 灰霉病菌对啶酰菌胺的敏感性比 2012 年明显下降。2012 年的敏感菌株占 77.7%， 低水平抗性菌株占 13.3%，高抗菌株频率为 10%；2013 年的敏感菌株占 64.9%， 低水平抗性菌株占 19.3%，高抗菌株占 15.8%。啶酰菌胺抗药性菌株在 PDA 平 板上的菌丝生长速率、产孢量、产菌核数与敏感菌株相比较无显著差异。抗药性 分子机制表明，抗药性分子机制为 SdhB 基因的 S244T 突变和 H277T 或 H277R 双重突变。 随机选取采自浙江省临安市、诸暨市、建德市、河北省、甘肃省、安徽省的 草莓和葡萄灰霉病菌共 36 株，测定其 ITS、SDHB、CYTB、TUB 4 段基因的序 列，并建立其系统进化树。结果表明，除了 SdhB 基因的进化可能与抗药性相关 外，其余菌株进化与地域、寄主和是否抗药无明显相关。 关键词：灰霉病菌；嘧菌酯；啶酰菌胺；系统进化树；抗药性分子机制 I AB ABSTRACT ABSTRACT Gray mold is one of the global fungal diseases, mostly caused by Botrytis cinerea. The main aspiration inhibitors to control Gray mold are Qo center inhibitor (QoIs)and the succinate dehydrogenase inhibitor(SDHIs). Shift of sensitivity to azoxystrobin (a Qo center inhibitor, QoI) from 2010 to 2012 in B. cinerea collected from strawberry, tomato, eggplant, and grape greenhouses in Zhejiang province was monitored by t