果蝇精巢Hub组织的荧光标记及effete调控果蝇精巢生殖干细胞数量的研究-细胞生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合安徽师范 大学硕士学位论文质量要求。 答辩委员会签名(工作单位、职称) : 主席: 委员: 导师: 缩写表及中英文对照 缩写 英文全称 中文 SC Stem cell 干细胞 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 GSC Germline stem cell 生殖干细胞 SSC Somatic stem cell 体节干细胞 GB gonialblast 成精原母细胞 EB Ethidium Brmide 溴化乙锭 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基乙砜 BSA Albumin from bovine serum 牛血清白蛋白 rpm revolutions per minute 每分钟转速 h hour 小时 min minute 分钟 sec second 秒 学 位 论 文 独 创 性 声 明 本 人 声 明 所 呈 交 的 学 位 论 文 是 本 人 在 导 师 指 导 下 进 行 的 研 究 工 作 及 取 得 的 研 究 成 果 ，与 我 一 同 工 作 的 同 志 对 本 研 究 所 做 的 任 何 贡 献 均 已 在 论 文 中 作 了 明 确 的 说 明 并 表 示 谢 意 ，除 了 文 中 特 别 加 以 标 注 和 致 谢 的 地 方 外 ， 论 文 中 不 包 含 其 他 人 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 研 究 成 果 。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书 本 学 位 论 文 作 者 完 全 了 解 安 徽 师 范 大 学 有 关 保 留 、使 用 学 位 论 文 的 规 定 ： 学 校 有 权 保 留 并 向 国 家 有 关 部 门 或 机 构 送 交 论 文 的 复 印 件 和 电 子 版 ，允 许 论 文 被 查 阅 和 借 阅 。本 人 授 权 安徽 师 范 大 学 可 以 将 学 位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 编 入 有 关 数 据 库 进 行 检 索 ， 可 以 采 用 影 印 、 缩 印 或 扫 描 等 复 制 手 段 保 存 、 汇 编 学 位 论 文 。 保 密 的 学 位 论 文 在 解 密 后 适 用 本 授 权 书 。 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 学位论文作者获学 位后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编： 果蝇精巢 Hub 组织的荧光标记 及 effete 调控精巢生殖干细胞数量的研究 摘 要 干细胞维持由特殊的微环境，或称干细胞的微生态系统（niche）产生的外 源因子以及其自身产生的内源因子共同调控。而内、外源因子对干细胞调控机制 目前还知之甚少。果蝇精巢中，生殖干细胞(GSC, germline stem cell)围绕着一个 由 10 到 15 个体节细胞构成的 Hub 组织，此组织即为果蝇精巢生殖干细胞的微 环境。干细胞维持与分化相关调控因子的研究将为生殖生物学和干细胞生物学的 发展提供有价值的资料。本课题以果蝇精巢生殖干细胞为研究对象，对 Hub 组 织进行了遗传学标记；同时研究了 effete 基因缺失对果蝇精巢干细胞数量的影响。 首先，利用 eGFP(enhanced green fluorescent protein)的荧光标记功能，从果 蝇基因组中扩增 DE-cadherin 特异性启动子，构建了上皮钙粘素 DE-cadherin 特 异性启动子驱动 gfp 报告基因的表达载体，通过转基因显微注射技术获得转基因 果蝇品系，用免疫组织化学方法对果蝇精巢 Hub 组织进行荧光染色。结果显示， eGFP 蛋白在 Hub 组织中大量表达。此项工作将为今后精巢生殖干细胞的定性与 定量提供便利。 其次，研究了果蝇的 effete 基因对精巢生殖干细胞维持的影响。effete 基因 （eff，也称为 UbcD1）从酵母到人类都高度保守，编码一种 E2 泛素结合酶。本 课题采用免疫组织化学方法，统计了野生型对照 w1118 与 effete 基因突变体果蝇在 羽化后第 2 天、第 7 天及第 14 天其精巢生殖干细胞的数量情况。研究结果表明， 在第 2 天、第 7 天和第 14 天拥有正常精巢 GSC 数量的精巢的百分数比例，野生 型果蝇分别为：91.4%，87.5%和 85.7%；而 effete 基因突变体果蝇分别为：88.9%， 35.0%和 16.0%。统计数据显示，羽化后第 2 天，实验组与对照组果蝇的精巢 GSC 无明显差异，GSC 平均数目仍然处于正常范围 7-10 个之间。羽化后第 7 天和第 14 天