过氧化氢干预下Rab30在PC12细胞中的表达及通路研究-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南华大学学位论文原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文 中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或 其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作 的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由 本人承担。 作者签名： 年 月 日 南华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文是本人在南华大学攻读 （博/硕）士学位期间在导师指 导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内 容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文 的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可 以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学 位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将 论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学 位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技 术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社 会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。 作者签名： 年 月 日 导师签名： 年 月 日 万方数据 万方数据 过氧化氢干预下 Rab30 在 PC12 细胞中的表达 及通路研究 专业：临床医学（神经病学） 研究生：严利 导师：周文胜 教授 摘要：目的：研究经过氧化氢（H2O2）损伤干预下 Rab30 在 PC12 细胞中的表达情况，初步探讨 Rab30 在 PC12 细胞中的信号通路。 方法：1、PC12 细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所，用完全 培养基(含 10%的胎牛血清、90%的 1640 培养液、100 U/ml 青-链 霉素溶液），调节 pH 值至为 7. 2~7.4, 于 37℃、5%CO2 饱和湿度 培养箱中培养，待细胞生长汇合率达 80%左右，用胰蛋白酶消化、 传代，选取对数生长期的细胞进行研究； 2、实验分为：正常组和 H2O2 组两组； 3、四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定各细胞存活率变化； 4、Annexin V-FITC/PI 双染法检测各组细胞的凋亡率； 5、Western-blot 法检测 Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3 的蛋白表达情况。 结果：1、PC12 细胞在显微镜下呈多角型细胞，贴壁不稳，易成团， 周围有晕光，折光度强，成簇生长，培养 5~7 天后可形成密集的 细胞簇，布满整个培养瓶。 2、用四甲基偶氮唑盐（MTT）酶反应检测法检测 PC12 细胞 I 存活率，发现经 H2O2 损伤干预后的吸光度 A 值（0.1577±0.0100） 与正常组 （ 0.2553±0.0084 ） 比 较 减 少 ， 差 异 有 统 计 学 意 义 （P0.05）； 3、用 Annexin V-FITC/PI 法检测细胞凋亡率，发现经 H2O2 损 伤 干 预 后 细 胞 的 凋 亡 率 明 显 增 加 ， 即 H2O2 组 （32.7500±1.0485，46.1167±1.1501）的早期凋亡率和总凋亡率 均较正常组（0.5033±0.0216，0.6333±0.0450）显著增加,差异有 统计学意义（均 P0.05）。 4、Western-blot 法检测各蛋白相对表达量，发现经 H2O2 损 伤干预后中的 JNK3、Caspase-3 在 PC12 细胞中表达较正常组显 著增加，Rab30、GM130 较正常组表达下降。Rab30 在 H2O2 组 （0.0570±0.0014）中的蛋白表达与正常组（0.2272±0.0020）比 较，P0.05，有统计学意义；JNK3 在 H2O2 组（0.6904±0.0211） 中蛋白表达与正常组（0.1167±0.0024）比较，P0.05，有统计 学 意 义 ； GM130 在 H2O2 组 （ 0.0821±0.0038 ）、 与 正 常 组 （0.2704±0.0053）比较，差异有统计学意义（P0.05）；Caspase-3 在 H2O2 组（0.8620±0.0198）与正常组（0.3232±0.0006）比较， 差别有统计学意义（P0.05）。 结论：1、H2O2可诱导PC12细胞损伤和凋亡； 2、H2O2干预下Rab30在PC12细胞中的表达下调； 3、H2O2可能通过激活JNK3的表达而下调Rab30、GM130的 表达，使高尔基体结构破碎成片，并可通过调控Caspase-3的表 II 达，诱导PC12细胞的凋亡和死亡。 关键词：PC12细胞；Rab3