海洋放线菌抗水产病原弧菌活性的研究-微生物学专业论文.docxVIP

游剑岚中山大学博士学位论文海洋放线菌抗病原弧菌活性的研究摘要本研究从中国南海近海沉积物中分离出94株海洋放线菌，其中87．3％为链霉菌，其优势类群为烬灰类群和灰红紫类群。通过平板对峙试验考察了海洋放线菌对六种水产病原弧菌的抑菌活性以及降解大分子有机物活性。并且考察了盐度对其抑菌活性的影响。结果表明，24．5％的海洋放线菌对水产病原弧菌有较强的抑制活性；超过50％的海洋放线菌能够降解蛋白质、淀粉、黄豆粉、纤维素等大分子有机物：超过60％的海洋放线菌能够溶解细菌细胞壁。筛选出6株海洋放线菌除了对弧菌有较强抑制活性之外，还能够有效地抑制大肠杆菌、枯草杆菌、铜绿假单孢菌和金黄色葡萄球菌；并且能够降解多种大分子有机物。更重要的是，它们均能够在3％的盐度环境中正常生长，其中三株海洋放线菌的抑菌活性不受盐度的影响。铁对许多致病菌的生存和致病性都有着重要的作用，致病弧菌也不例外。首先，建立了一个比传统方法操作简便、成本低、对微生物毒性小、检出率高、受铁的弱亲和物质干扰小，适用范围更广的产铁载体活性初筛方法。筛选出52株具有产铁载体活性的海洋放线菌。讨论了环境中铁离子浓度在海洋放线菌对弧菌的抑制中的影响。发现四株具有产铁载体活性的海洋放线菌对弧菌的抑制活性随环境中铁离子浓度的增加而减弱。选取其中一株，与哈维氏弧菌H，通过共培养试验证明，铁营养竞争也是海洋放线菌抑制弧菌的机制之一。说明，控制环境中的铁离子浓度对于控制哈维氏弧菌病害有着重要的意义。哈维氏弧菌H在贫铁条件下容易被抑制，可能是因为缺乏有效的获得铁的能力，也可能是其生长对铁浓度的要求比较高。关于哈维氏弧菌在贫铁条件下应激产生的蛋白的研究未见报道。因此，初步探讨了哈维氏弧菌H在贫铁条件下应激产生的外膜蛋白的分离。通过对肽指纹图谱和飞行时问质谱测得的肽段序列分析，初步鉴定了哈维氏弧菌H在贫铁条件下应激产生的可能与铁转运相关一个外膜蛋白。为了进一步证实哈维氏弧菌H在贫铁条件的胁迫下具有相应的调控机制，采用保守DNA序列作为引物扩增出一段与副溶血弧菌的铁调控基因同源游剑岚中山大学博士学位论文性达到89％的基因片断，初步判断哈维氏弧菌H也具有相应的铁调控机制。那么，哈维氏弧菌H在贫铁条件下采取了积极应对的策略。此结果进一步为阐明产铁载体海洋放线菌对哈维氏弧菌H在限铁条件下的抑制增强提供了依据。细菌生物膜中的细胞对含氯消毒剂和抗生素等的耐受性比游离细胞强成千倍，并且在一定条件下细菌生物膜会脱落，形成新的病灶。目前，对于细菌生物膜的防治主要集中在人类致病菌、医疗器械等方面，其对水产养殖方面的危害没有得到应有的重视。为了研究对弧菌生物膜的防治，首先对弧菌生物膜的形成做了较系统的研究，发现水体环境中的糖类物质会促进弧菌生物膜的形成，尤其是海藻酸钠、甘油、黄豆粉等。因此，要控制水产养殖中弧菌生物膜的形成应该减少上述物质的过渡投放或集聚。依据各种因素对弧茵生物膜的影响，确立了能够稳定形成弧菌生物膜的体系，建立了筛选抑制弧菌生物膜形成和降解弧菌生物膜活性的模型。首次，将海洋放线菌用于弧菌生物膜的控制，包括抑制弧菌生物膜的形成和对弧菌生物膜的破坏。筛选出四株能够抑制生物膜形成和能够破坏弧菌生物膜的海洋放线菌。并且筛选出四株能够抑制生物膜形成有能干扰细菌密度感应系统的海洋放线菌。海洋放线菌对海洋致病弧菌的抑制作用体现在抑制弧菌的生长、通过铁营养竞争对弧菌有效地抑制、抑制弧菌生物膜的形成和破坏弧菌生物膜等几个方面。海洋放线菌作为有益菌的优势在于其生理和代谢活性上能够适应海洋环境，并且具有降解多种大分子有机物活性。本研究中有些海洋放线菌具有多种生物活性，并且是优势类群。这些放线菌具有开发成海洋水产养殖有益菌的潜力。关键词：海洋放线菌、病原弧菌、铁载体、生物膜游剑岚中山大学博士学位论文TheinhibitionofaquaculturepathogenicⅥbriobymarineactinomycetesAbstractAtotalof94actinomycetestrainswereisolatedfromthemarinesedimentsofthenear-shoreofSomh-ChinaSea．87．3％oftheisolatesbelongedtothegenusStreptomyces,otllersbelongedtoMicmmonospora．Thecinerogrisensgroupwasthedominantgroupamongthestreptomyceteisolates．24．5％ofmarineaetinomycetestrainscouldinhibitallthesevenHbriospeciestested；morethan50％ofmarineactinomycetestrains