海洋黑曲霉液体发酵耐盐纤维素酶的培养条件优化和扩大化生产-生物工程专业论文.docxVIP

JIIIIIIIIIIIUIIIIIIIY3111141浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位做作毒张渐)虱签字日期：2夕／／名，年6A阡日|学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙婆太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)J学位论文作者张胁团导师签名：1≥签字日期：2形年多月J7红签字日期：2田厂么年6月，争日万方数据本课题承受国家自然科学基金科学基金项目(编号、浙江省公益技术研究社会发展项目(编号：2015c33219)、舟山市科技计划项目(编号：2014C51022)资助万方数据浙江大学硕士论文摘要致谢一转眼，三年的时光已经逝去。回想第一次来浙大参加研究生复试，当时充满了忐忑，而现在已经临近毕业了。在这三年里，我成长了很多，也发自内心地感谢，感谢这三年来一直在我身边指导、鼓励和帮助我的老师、同学以及朋友们。首先我要衷心感谢姚善泾和杨志坚二位导师的教导。在研究生生涯中，姚老师始终悉心指导我，从课题的开题、拓展到论文的撰写，姚老师给了我极大的帮助。姚老师宽广的心胸、过人的眼光、渊博的知识深深地影响了我对人生的认识，使我终生受益。在舟山科研生活中，杨老师不厌其烦地指导我，鼓励我，使我顺利完成了研究生的课题研究和项目研究。杨老师实事求是的精神、充满希望和魅力的展望深深地刺激着我努力去学习，去挑战这未知的未来。在此，再次向姚老师和杨老师表达最真诚的感谢和深深的敬意!其次非常感谢课题组林东强、关怡新、梅乐和以及张其磊等四位老师在我课题、学术以及生活上的指导和关心。在此特向各位老师表达我最诚挚的感谢和问候。很感谢陆涛、王红兵师兄及刘晓晶师姐三位在研一的实验和生活中的支持和鼓励，感谢袁俊杰、王存响、白冬梅三位同学在我学业和生活中的帮助和支持，感谢唐川、卢慧丽、王荣柱、武强、吴庆喜、沈煜斌、袁晓明、童红飞、严军、施伟、吕常江、陈传鑫、吴启赐、虞骥、鲁丹萍、王明霞、徐阳光、禚孝发、辛新、王俊雄、刘韬、李菁、蔡礼年、关今韬、罗颖娣、褚文宁、雷颖颖、王艳婷、徐诗文、陈逸文、曲丽丽、蒋姗姗、张澄、魏丹华、陈圣刚、洪冬晓、杨瑞琪、王亚伟等一起在实验室学习和生活的同学们，感谢你们的热情帮助，我会记得这段美好的时光。同时非常感谢舟山海洋研究中心的郑刚师兄，是他帮我度过了刚开始不适应的舟山生活，在我生活和实验中给了我极大的关心、照顾和支持。也感谢杨水兵、肖金星、何靖等师兄和余海霞师姐的关心和帮助。感谢陈逸文、曲丽丽二位在实验方面对我的帮助。感谢董开成、龚安建、颜顺、胡弱、齐淑圆、程涛、符莎露等小伙伴们，感谢一起在舟山度过的美好时光。最后也感谢我的家人和朋友一直以来对我的支持和鼓励，使我对以后的生活和工作充满热忱，勇敢前进。2016年5月于浙大玉泉万方数据浙江大学硕士论文摘要摘要纤维素酶是一种复合酶，主要由内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶以及p．葡萄糖苷酶组成。这三种酶通过协同作用，将纤维素降解成可利用的还原糖，因此广泛应用于很多行业之中。而本文所讲述的海洋黑曲霉能生产一种耐盐性纤维素酶由于其耐盐特性即能在高盐条件下高效降解纤维素，因此在造纸废水的处理、开发利用海洋纤维素垃圾、开发利用海洋纤维素资源以及纤维素原料预处理废水的处理以等有着极大的应用价值和前景。一本文主要开展海洋黑曲霉产纤维素酶发酵的研究，包括摇瓶试验和优化，摇瓶试验到发酵罐上的扩大发酵、对粗酶液的初步浓缩和纯化，以及与普通纤维素酶进行耐盐性以及酶学性质的比对和分析。具体研究内容如下：首先进行了纤维素酶摇瓶上液体发酵的优化。通过单因素试验初步确定碳源、氮源、温度、表面活性剂、接种量、装液量以及初始pH；随后选择Plackett．Burman(PB)设计挑选出影响滤纸酶活的主要成分为麸皮和吐温一80；再通过爬坡试验，使麸皮和吐温-80浓度接近最大酶活区域；接着选择响应面分析快速有效地求得该菌株产耐盐性纤维素酶的最佳培养基配方；最后进行了变温培养实验确定适宜的稳定期培养温度。得到了优化的发酵条件为麸皮5．53％、玉米浆O．5％、磷酸二氢钾0．2％、Tween-800．197％、初始pH5．0、接种量8％、装液量40mL、180rpm，37℃培养2天后继续28。C培养2天。优化后的滤