生殖免疫与生殖疾病.ppt

（四）TORCH感染的免疫学检测 TORCH 弓形体(Tox ) 风疹病毒( (Ruv) 巨细胞病毒(CMV) 单纯疱疹病毒(HSV) 其他病原体(O) 生殖免疫诊断技术 生殖系感染的免疫实验诊断 1.弓形体检测 （1）在组织液和组织病灶中直接镜检找病原体。 （2） 病原体分离：动物接种分离弓形虫。 （3） PCR检测：用孕妇宫颈分泌物、羊水、脐血等检测弓形虫DNA。 （4） 间接免疫荧光试验、间接血凝试验、补体结合试验和ELISA等检测血清抗体。 2.风疹病毒 （1）特异性抗体检测如血凝抑制试验、ELISA法等。 （2）RNA检测：用聚合酶链反应（PCR）法 生殖免疫诊断技术 生殖系感染的免疫实验诊断 3.巨细胞病毒 （1）病毒分离。 （2）血清特异性抗体检测：主要有放射免疫试验(RIA)、免疫荧光试验(IF)、免疫印迹试验 (IB)、间接血凝试验(IHA)、补体结合试验(CV)和ELISA等。 （3）DNA的检测如PCR法，mRNA的检测如反转录PCR(RT—PCR法)。 4.单纯疱疹病毒 （1）分离病毒病原体 （2）抗原测定 （3）DNA的检测如PCR法 （4）特异性抗体检测如ELISA 生殖免疫诊断技术 生殖系感染的免疫实验诊断 5.TORCH宫内感染的免疫学诊断 孕期TORCH感染相当普遍，但只有近期或活动性感染并发展到宫内感染时才会危及胎儿引起不良妊娠结局 PCR技术用于病原体DNA或RNA检测,敏感、准确、快速 与TORCH宫内感染相关的免疫分子的检测 生殖免疫诊断技术 生殖系感染的免疫实验诊断 （五）HPV感染的检测 HPV分型及病理学作用 目前已知的HPV有110多种，根据病毒致癌性的大小分为两大类： (1)低危型HPV(非癌性相关型，LRHPV) (2)高危型HPV(癌相关型，HRHPV) HPV感染与宫颈癌及癌前病变密切相关 宫颈癌常规筛查方法分析：宫颈巴氏涂片及组织学荧光分光镜检查法等。 生殖免疫诊断技术 生殖系感染的免疫实验诊断 HPV检测方法 1.传统的细胞学检测方法及其进展: 巴氏涂片法、薄层液基制片技术、计算机辅助检测技术等。 2.HPV-DNA检测方法 通用型引物聚合酶链反应(PCR)?、核酸杂交检测?、核酸印迹原位杂交、斑点印迹 原位杂交?、杂交捕获法(hybrid capture- II，又称HC-Ⅱ系统)?。 3.血清学检测试验 初筛试验:酶联免疫吸附试验(EL1SA) 、快速检测(RT)实验 确认试验:免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIV I) 、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。 4.分子生物学检测技术 自动化PCR检测技术、荧光实时定量PCR技术 5.生物芯片技术的应用 生殖免疫诊断技术 生殖系感染的免疫实验诊断 4.生殖系肿瘤的免疫学实验诊断 目前临床广泛应用的肿瘤标志物主要有胚胎抗原，天然自身抗原，糖类抗原，细胞角蛋白，肿瘤相关的酶、激素以及某些癌基因等。 ELISA和酶免疫化学发光技术常用于检测血液或其他体 液中肿瘤标记物。 免疫组化、流式细胞技术等用于检测肿瘤细胞表面标记物 。 原位杂交、PCR等技术已用于测定癌基因、抑癌基因、端粒酶及细胞因子基因。 单克隆抗体与同位素结合物的体内示踪技术，有助于对肿瘤的早期诊断和定位 。 生殖免疫诊断技术 （一）固相非竞争的直接夹心ELISA法检测肿瘤标记物 以双抗体夹心法为例，操作步骤如下 生殖免疫诊断技术 生殖系肿瘤的免疫学实验诊断 （1）本法测定二价或二价以上的大分子抗原。 不适用于测定半抗原及小分子单价抗原。 （2）标本中含RF存在时，可出现假阳性， 采用F（ab）或Fab片段作酶结合物的试剂， 由于去除了Fc段，可消除RF的干扰。 （二）生殖系肿瘤常用主要酶免疫学检测指标 1.血清糖蛋白抗原肿瘤标记物 （1）CA-l25:为上皮性卵巢癌细胞膜上的一 种高分子糖蛋白,是特异性较高的卵巢上皮癌标志物和子宫内膜癌的标志物。 （2）CA-153：属乳腺细胞膜表面糖蛋白的变异体，是乳腺癌的特异性血清学标志物。 （3）CA-199：是一种类粘蛋白的糖蛋白成分，与LewiS血型成分有关，是对胰腺癌敏感性最高的标志物，主要用于监测胃肠道恶性肿瘤。 （4） CA-50。 （5）癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）。 （6）鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCCA）。 （7）前列腺特异性抗原（prostatespecific antigen，P