靶点活性快速发现苦蘵中靶向Hsp90抗胰腺癌有效成分-药学学报.PDF

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2019, 54(3): 475 −481 ·475 · “靶点+活性”快速发现苦蘵中靶向Hsp90 抗胰腺癌有效成分的研究 1 2 2 2 2 2 2* 钱亚芳 , 杨 波 , 冯 迪 , 钱亿帆 , 吴亚莉 , 张 姁 , 谷满仓 (1. 浙江中医药大学附属第一医院(浙江省中医院), 浙江杭州310006; 2. 浙江中医药大学药学院, 浙江杭州310053) 摘要: 本研究基于“靶点+活性”双重导向快速发现技术筛选苦蘵中靶向Hsp90 蛋白杀伤胰腺癌细胞的活性单 体。通过将体外抗肿瘤活性筛选技术、双萤光素酶报告基因技术与多元色谱分离技术相耦合, 从中药苦蘵中筛选靶 向Hsp90 的活性单体。研究化合物抗胰腺癌细胞BXPC-3 生长活性, 初步探讨化合物抑制Hsp90 分子机制。结果显 示从苦蘵中分离得到醉茄内酯类化合物withanolide E (WE) 与4β-hydroxywithanolide E (HWE) 。MTT 结果显示, WE 与HWE 处理BXPC-3 细胞48 h 的半数抑制率(IC50) 分别为0.71±0.03 和1.23±0.10 μmol ·L-1; 萤光素酶报告基因 实验结果显示, WE 与HWE 可使细胞热休克元件活性增强12.5±3.4 倍与28.1±3.4 倍; 两者均呈现量效与时效关系。 分子机制研究提示, 与DMSO 组相比5 μmol ·L-1 WE 和HWE 分别处理BXPC-3 细胞48 h 可诱导Hsp90 二聚体蛋白 表达上调6.5± 1.3 和11.8±2.0 倍, Hsp90 客户蛋白Akt 表达下调至DMSO 组的21.7%±2.8% 和9.8%± 1.4%; shRNA 干 扰Hsp90 基因表达可阻断其抑制Akt 表达与杀伤肿瘤细胞的作用。采用“靶点+活性”双重导向快速发现技术可从 苦蘵中筛选得到靶向Hsp90 蛋白杀伤胰腺癌细胞的活性单体WE 与HWE; 其分子机制可能与诱导胰腺癌细胞形成 无活性Hsp90 二聚体, 进而抑制Hsp90 客户蛋白Akt 表达有关。 关键词: 双重导向快速筛选; 苦蘵; 双荧光素酶报告基因; 热休克蛋白90; 胰腺癌细胞 中图分类号: R965.1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870(2019)03-0475-07 The target + activity method for rapid discovery of active compounds targeting Hsp90 in pancreatic cancer cells from Physalis angulata L. 1 2 2 2 2 2 2* QIAN Ya-fang , YANG Bo , FENG Di , QIAN Yi-fan , WU Ya-li , ZHANG Xu , GU Man-cang (1. The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University (Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine), Hangzhou 310006, China; 2. School of Pharmace