海洋微藻的分离 无菌化和异养培养-渔业专业论文.docxVIP

海洋微藻的分离、无菌化和异养培养学位论文完成日期： 海洋微藻的分离、无菌化和异养培养 学位论文完成日期： 篆加tf·-l‘．z乒 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： 独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得 或其他教育机构的 学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在 论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：砂日蝴 签字日期：7011年g月坩日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： 1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论 文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国 学术期刊(光盘版)电子杂志社用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授 权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保 密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位做作者虢峭 替弘 0 签字日期：‘户11年孓月’叶日 ㈡叩 窜胁 阳 海洋微藻的分离、无菌化和异养培养 海洋微藻的分离、无菌化和异养培养 摘 要 为了得到无菌藻株并进行异养实验，本实验采用抗生素法对小球藻C95 (Chlorella sp．)，三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)和球等鞭金藻8701 (Isochrysis galbana)三种微藻进行了无菌化实验。研究选取了卡那霉素 (kanamyein)、链霉素(streptomycin)、新霉素(neomycin)、青霉素(penicillin) 和庆大霉素(gentamycin)五种抗生素，在终浓度100 m#L、200 mg／L、400 mg／L 时分别对三种藻进行了抗生素敏感性分析，实验结果表明五种抗生素均对小球藻 C95产生了不同程度的抑制；除链霉素外，其它四种抗生素对三角褐指藻均有一 定程度的促进作用；球等鞭金藻8701对五种抗生素敏感性变化较大，链霉素在低 浓度时有明显促进作用(PO．01)，卡那霉素几乎没有任何影响，其它三种抗生 素在高浓度时均有不同程度的抑制作用。 从小球藻C95、三角褐指藻和球等鞭金藻8701中分别分离出5株、5株和3 株细菌菌株，分别标记为A1．A5、B1．B5和C1．C3，并进行了抗生素的抑菌效果 实验。结果表明在小球藻中只有新霉素在高浓度时可以很好的抑制A4，但同时新 霉素对A1无效，其它四种抗生素均能有效抑制除A4菌株外的其他菌株。三角褐 指藻中卡那霉素能有效抑制B4菌株，但对B3无效，新霉素可以有效抑制4株细 菌，其它3种抗生素只能有效抑制3株细菌。球等鞭金藻8701中的C3仅在高浓 度的新霉素中才能被有效抑制，但新霉素对C1无效，庆大霉素对3株细菌均不 能有效抑制，卡那霉素仅抑制C1，链霉素和青霉素可有效抑制C1和C2。 结合抑菌效果，针对每株藻设计出两组抗生素组合进行无菌化实验，每组三 种抗生素，分三次加入。结果表明该组合可以抑制大部分细菌，但不能完全杀灭。 根据此实验结果对下一步实验进行调整。采用重新设计抗生素组合，或在舵异 养培养基上追加相同抗生素组合，或传代追加三次抗生素组合，用这三种方法进 一步对藻株进行无菌化培养。结果表明，重新设计的抗生素组合及舵异养培养 基上追加抗生素使小球藻C95达到了无菌化的效果，而追加抗生素组合实验中的 细菌未减反增。进一步对无菌化小球藻C95在两种异养培养基上进行了异养驯化。 经过20天的驯化，小球藻C95可进行异养培养。且在两种异养培养基中，小球 藻C95的生长差别较大，表明培养基是影响异养培养的一个重要因素。 本研究同时还分别从青岛和海南两地采集水样并采用平板法进行了微藻的分 本研究同时还分别从青岛和海南两地采集水样并采用平板法进行了微藻的分 离，共分离得到24株微藻。采用干重法对其中20株微藻进行了生物量的测定， 同时利用ITS序列对其中13株藻的系统发生及分类地位进行分析。结果显示13 株藻共聚为三支，分属于栅藻科链带藻属(Desmodesmus)、盘苔藻属(Blidingia) 和小球藻属(ChIorella)。实验还利用无菌化实验的结果对其中的4株分离藻进行 了无菌化处理，并获得了1株无菌藻株。 关键词：微藻；无菌化；异养培养：分离；ITS Isolation，sterilization Isolation，