肠炎弧菌胞外蛋白基因表现及调控之研究II.PDF

行政院國家科學委員會專題研究計畫成果報告 腸炎弧菌胞外蛋白 基因表現及調控之研究 (II) The study of expression and regulation of extracellular protease gene from Vibrio parahaemolyticus (II) 計畫編號 ：NSC 88-2313-B-002-022 執行期限 ：87年8月1日至88年7月31 日 主持人 ：李佳音 國立台灣大學農業化學研究所 E’mail : M477@ccms.ntu.edu.tw 一、中文摘要 plays an important role in using hemolysin in some vibrios. We have cloned an 腸炎弧菌 Vibrio parahaemolyticus extracellular protease gene, prtV gene, from 為國內常見之主要食品病原菌 ，多種弧菌 V. parahaemolyticus. Besides, concentrations 之胞外蛋白 已知可能參與該菌利用血紅 of iron ion and NaCl will affect the 素的角色 ，目前我們已從腸炎弧菌中選殖 expression ofprtV gene. The result of primer extension experiment revealed that the 出一段胞外蛋白 prtV 基因，且已證實培 transcription start site of the prtV gene 養基中的鐵離子及鹽離子濃度皆會影響此 located 83 bp upstream of the translation start 基因的表現量。由 primer extension 實驗結 site. Besides, there are two iron boxes 果顯示預測的啟動子區域約位於轉譯起始 overlapped with the – 10 and –35 site of the 點約 83 base 的上游處。且此啟動子區域 promoter region. To prove whether Fur 的 – 10 及 –35 序列處各出現一個 Iron protein will bind to these two Iron boxes, Fur box 。大量表現純化腸炎弧菌的 Fur 蛋白 protein of V. parahaemolyticus was highly 質進一步以 DNA retardation 試驗證實 expressed and 385 bp DNA fragment Fur 蛋白質與 prtV 基因上游的 385 bp containing the promoter region was eluted. In DNA 片段確實有兩個鍵結的位置。同時萃 the DNA retardation assay, we demonstrated that there are two Fur protein binding sites 取野生株及 prtV