萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒.PDF

萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 产品编号 产品名称 包装 005 萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒 100次 产品简介：  萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit) ，是一种以萤光素(luciferin)为 底物来检测萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)活性的试剂盒。  萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP 、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成 oxyluciferin 。在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence) 。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或 液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考图1。 图1. 萤火虫萤光素酶的检测原理图。  通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或 5’启动子区克隆在luciferase 的上游，或把3’-UTR 区克隆在luciferase 的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转 染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因 的转录调控作用。  萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm) 。  本试剂盒可以测定100个样品。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 005 -1 报告基因细胞裂解液 60ml RG005-2 萤火虫萤光素酶检测试剂 10ml — 说明书 1份 保存条件： 报告基因细胞裂解液4ºC保存3个月有效，-20ºC保存一年有效；萤光素酶检测试剂-20ºC避光保存6个月有效，-80ºC避光保存 一年有效。 注意事项：  为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内， 例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检 测试剂。  由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。  为保证萤光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。经测 试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。  样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是 同一批样品宜使用相同的测定时间。  为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入海肾萤光素酶(Renilla luciferase) 的报告基因质粒 萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, β-gal)报告基因质粒作为内参 β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒 (RG0036)进行检测。采用本试剂盒 中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)的检测。  本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。 a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后，参考 下表加入适量报告基因细胞裂解液。 器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板