海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用-遗传学专业论文.docxVIP

海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用 海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用 海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用 摘要 随着集约化、高密度养殖的迅速发展，海水鱼类养殖业遭受各种鱼类疾病暴 发的困扰，严重影响了海水养殖业的发展。其中细菌性鱼病是危害养殖鱼类的一 类主要疾病，每年给水产养殖业造成重大的经济损失。多年来一直使用广谱抗生 素和化学药物进行鱼类细菌病害的防治，致使病原菌的抗药性增加，且药物残留 对水环境的污染日益严重，另外，药物残留还会对人体构成潜在的威胁。本论文 针对海水鱼类频繁发生的细菌性疾病，进行了主要海水鱼类致病菌的优化培养， 在此基础上进行了鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、迟缓爱德华氏菌多联灭活 疫苗研制，并进行了多联疫苗对大菱鲆的免疫研究以及大肠杆菌表达的鳗弧菌外 膜蛋白对海水养殖牙鲆的研究。 分别进行了鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、迟缓爱德华氏菌的优化培养， 测定了不同温度、盐度、培养基初始pH、培养基成分配比对四种病原菌生长的 影响，结果表明，鳗弧菌培养的最佳条件是：培养温度为28℃，培养盐度低于 20，培养基初始pH范围在6．O～8．0。哈维氏弧菌培养的最佳条件是：温度为28 ℃、盐度为10～30、pH为5．O～9．0。副溶血弧菌的适宜繁殖温度为28℃、盐度 为20～40、pU值为7．O～9．0。迟缓爱德华氏菌的适宜生长条件是：温度30C、 盐度10～20、pU6．O～7．0。 制备了大菱鲆常见病原菌鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌和迟缓爱德华氏 菌的联合疫苗，进行了大菱鲆的免疫研究。对海水养殖大菱鲆进行腹腔注射免疫， 14天后用同样方法加强免疫一次，定期采血测定抗体凝集效价，70 d后分别用10 L10 cFU／ⅡlL的鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌和迟缓爱德华氏菌腹腔注射 感染免疫鱼。结果表明在免疫7 d后大菱鲆血清中产生了四种病原菌的特异性抗 体，并且在21～57 d内达到高峰，鳗弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌和迟缓爱 德华氏菌的最高抗体效价分别是2“7、2”、2“和2“1，在70 d时4种菌的 特异性抗体仍维持较高水平，分另JJ是2”、2”、矛”和2“‘。70 d时鳗弧菌、 哈维氏弧菌人工感染大菱鲆的免疫保护力分别为66．67％、44．44％，而副溶血弧 菌和迟缓爱德华氏菌感染的免疫保护力分别为20．00％和8．33％。 海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用制备了大肠杆菌表达的致病性鳗弧菌外膜蛋白，SDS．PAGE分析表明表达蛋 海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用 制备了大肠杆菌表达的致病性鳗弧菌外膜蛋白，SDS．PAGE分析表明表达蛋 白分子量约38kDa,Western Not分析发现表达蛋白能与鳗弧菌外膜蛋白抗体很好 的反应。用不同剂量表达的鳗弧菌外膜蛋白对牙鲆进行了腹腔注射免疫研究，于 28d后用鳗弧菌悬液(3．29×108CFU／m1)0．2ml对免疫牙鲆人工感染试验，结果表 明用表达的鳗弧菌外膜蛋白免疫牙鲆，经人工感染后的免疫保护力分别为20．00％ 和33．33％。 关键词：弧菌，多联疫苗，免疫应答，免疫保护率(RPs) 2 海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用DeveIopment 海水养殖鱼类主要细菌病多联疫苗的研制及应用 DeveIopment and appI icatiOn on poIyvaIent vaccine of bacteriaI pathogens of marine fi sh Abstract Culture of marine fish progresses to the level of lligh density and iIltellsi劬 accompanied by a prominence of disease problem．Bacterial diseases are the main pathogens．which can cal】se large-scale mortalities of marine risks and mass economical loss in the world．Control of fish diseases using therapeutics such as antibiotics have met problems including potential development of resistant bacteria, concern over drug residues and environmental impacts．In the present study,the optimization of cult