鳜肌肉生长抑制素、肌酸激酶基因的克隆与组织表达-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单 上海海洋大学硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 李家乐 上海海洋大学 教授 主席 周文玉 上海市水产研究所 研究员 委员 李思发 上海海洋大学 教授 委员 委员 委员 张俊玲 上海海洋大学 讲师 秘书 答辩地点 生命学院C217 答辩日期 2010年6月11日 上海海洋大学硕士学位论文鳜肌肉生长抑制素、肌酸激酶基因的克隆与组织表达 上海海洋大学硕士学位论文 鳜肌肉生长抑制素、肌酸激酶基因的克隆与组织表达 摘 要 采用分子克隆技术首次获得了鳜(Sinipelca chuatsi)肌肉生长抑制素 (myostatin，MSTN)和肌酸激酶(creatine kinase，CK)基因cDNA序列，分析了 它们在卵巢、肾脏、眼、肌肉、心脏、脑、皮肤、胃和肝胰脏中表达特征，为进 一步研究这两种基因的时空表达、功能及其转录调控奠定了分子基础，为鱼类生 长和能量代谢的分子机制研究提供了新的资料。 采用RT-PCR和RACE等技术克隆了鳜肌肉myostatin和creatine kinase eDNA 全长序列，结果表明：myostatin eDNA全长序列2627bp，包括5’端非翻译区ll 7 bp， 3’端非翻译区1 376 bp和开放阅读框(ORF)1 134 bp，共编码377个氨基酸，含 ● 22个氨基酸的信号肽；鳜MSTN具有脊椎动物MSTN的共同序列特征，含有1个 蛋白酶水解位点RARR和9个保守的半胱氨酸残基，与其他脊椎动物MSTN氨基 酸序列有着较高的相似性(62％----94％)，特别是C端生物活性区，氨基酸数目都 一致；与其它鱼类MSTN氨基酸序列相似度在90％-94％。CK全长序列1586bp， 包括5’端非翻译区92 bp，3’端非翻译区348 bp和开放阅读框(ORF)1 146 bp，共 编码381个氨基酸，鳜CK具有脊椎动物CK共有的保守结构域和肌型肌酸激酶 (M．CK)同工酶的特异识别位点；具有脊椎动物肌酸激酶共有的6个高度保守的 结构域。其中，结构域4区含有绝对保守、高度活性的Cys．283和腺苷酸结合功能 域(LGXGXXGXV)，结构域3区包含肌酸激酶特有的Lys．196。鳜CK氨基酸序 列与M．CK型的相似度最高(91．9％-97．4％)，而与脑型肌酸激酶(B．CK)和线 粒体型肌酸激酶(Mi．CKs)的相似度较低。 RT-PCR检测了MSTN和M．CK在各组织中的表达情况，结果显示：MSTN在卵 巢、肾、眼、肌肉、心、脑、皮肤和胃中有表达，肝胰脏未见表达。M．CK在皮肤、 卵巢、肾脏、胃、肌肉和心脏中表达较强，在眼和脑、肝胰脏中表达较弱，组织 表达差异为鱼类生长、能量调控研究奠定分子基础。 关键词：鳜，肌肉生长抑制素，肌酸激酶，RACE，RT．PCR，组织表达 上海海洋大学硕：I：学位论文Molecular 上海海洋大学硕：I：学位论文 Molecular Cloning，Characterization and Expression of Myostatin and Creatine kinase from Mandarin Fish 6。S‘／l clluatst AB STPACT In this study,the complete eDNA sequences of myostatin and creatine kinase of Siniperca chuatsi wore isolated from muscle by the molecular clone technology． Expression of two genes in ovary,kidney,eye，muscle，heart,brain,skin,stomach and liver of adult fish were studied by RT·PCR．These results may lay the foundation for further study on temporal and spatial expression,function and regulation for transcription of these two genes，and also provide new material for the molecular ● characteristic of fish and metabolism． growth energy 111e complete eDNA sequences of myostatin and ereatine kinase wore isolated by means of RT-