第三章样品前处理和药物提取技术.doc

PAGE PAGE 40 第三章样品前处理和药物提取技术 （Sample Preparation and Extraction Techniques of Drugs） 1.掌握样品制备的目的，生物样品预处理一般流程；常用生物样品的制备方法；去除蛋白质的常用方法；缀合物的水解方法；样品预处理应考虑的因素；影响液-液萃取操作过程中的因素；固相萃取技术的原理和特点； 2.熟悉衍生化常用技术，柱切换技术及应用，膜技术，微透析技术及其湍流色谱技术。 3．了解各方法的发展方向。 在过去的几十年里，测量技术有了空前的发展，但大部分情况下，还达不到非侵袭性测量，在药物分析中，我们经常会进行一步或多步的前处理步骤，达到富集，纯化和使测量信号提高的目的。目前样品制备技术已经发展成为分析/测量学科的一个分支。 药物测量过程一般包括采集样品，样品制备和分析测量三部分。每一部分的要求不同。采集样品要体现样品的代表性；样品制备过程要保证目标化合物的物理化学性质不改变。样品制备采用什么方法取决于目标化合物本身的性质，样品基质，目标化合物的浓度水平和所使用的分析技术；分析测量采用什么方法取决于所分析的目标化合物性质，如色谱技术用于有机物的分析，原子吸收用于金属离子的分析等。 在药物分析中，经常需要通过分析的手段了解药物在体内的数量与质量的变化，以便获得药物动力学的各种参数及药物生物转化、转运的方式和途径等信息。但由于被测生物样品中的药物或代谢物的浓度极低；生物样品中存在各种直接或间接影响测定结果的内源性物质；且样品量少，尤其在连续测定时，很难再度获得完全相同的样品，使得在测定生物样品中的药物及其代谢物时，一般要在测定前进行样品的前处理，即进行分离、纯化、浓集，必要时还需对待测组分进行有机破坏和化学衍生化，从而为后续的测定创造良好的条件。 本章讨论的样品的有机破坏和提取净化方法也同样适用于药物质量控制中鉴别、检查和含量测定用样品的制备。 第一节、生物样品的采集、制备、贮存 （Collection, Preparation and Storage of Biological Samples） 药物分析中的生物样品是一切能够反映用药部位药物浓度的体液、组织和器官。如血液、尿液、唾液、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、头发、肝脏，肾脏，心脏，肺脏及肠道和脑组织等，其中最常用的生物样品是血液、尿液和唾液。血液中药物浓度与作用部位的药物浓度呈正相关，可以较好地体现药物浓度和治疗作用之间的关系。尿液一般用于生物利用度、尿药排泄量及尿中药物或其代谢物等的测定。当唾液中的药物浓度与血浆中的药物浓度比值恒定时，其中的药物浓度可以代表血浆中游离药物浓度，但这种情况仅有少数药物适用。其他生物样品在相应的条件下也会被采用，如由于血脑屏障的存在，一般不用脑脊液做药物分析，但是当有病原微生物侵入脑组织，使得血脑屏障受到损害，此时可采用脑脊液进行药物浓度测定；头发作为生物样品一般用来监测滥用药物及用于测定微量元素的含量；在进行动物试验研究药物的体内吸收、分布状态及由于过量服用药物导致中毒死亡欲测定人体内的药物浓度时，常采用肝、胃、肾、肺、脑、肌肉等脏器组织作为生物样品。在特殊情况下也有采用乳汁、精液、泪液等作为生物样品。 （一）血液样品 1．血样采集 若能直接从动脉或心脏取血最为理想，对于人来说很困难，一般只有在尸体药检时才能取到心血。目前使用较多的采血方法是从静脉采血。 在做静脉取血时，通常是在血管里扎下“滞留针”用一次性注射器从“滞留针”里抽血或直接将注射器针头扎入静脉血管内抽取，抽取的血液移至试管或其他容器时，注意不要用力压出，最好取下针头后轻轻推出，以防溶血。 2．血样制备 对于大多数药物来说，血浆或血清药物浓度与红细胞中药物浓度成正比，所以测定全血不能提供更多的数据，而全血的纯化较血浆或血清麻烦，尤其是溶血后，血红蛋白等会给测定带来影响。且当药物在体内达到稳态血药浓度时，血浆、血清的化学成分与组织液相近，内含药物直接与组织液接触并达到平衡，有较好的对应关系。所以除特殊情况外，一般测定血中药物的浓度，通常是指测定血浆（plasma）或血清（serum）中药物的浓度，而不是指全血(whole blood)中药物的浓度，即血浆和血清是体内药物分析最常用的血液样本。但是某些药物与红细胞结合，或药物在血浆和血细胞中的分配比率因病人不同而异，或需专门测定平均分布于血细胞内、外的药物浓度时，或某些情况下由于血浆内药物浓度波动太大，且又难以控制，或因血浆药物浓度很低而影响测定时，则宜采用全血。 （1）血浆的制备 将采集的静脉血置含有抗凝剂的试管中，混合后，以2500～3000 r／min离心5～10 min使与血细胞分离，所得淡黄色上清液即为血浆。最常用的抗凝剂有