鸡XOD亚基的原核表达、定位及其在NIBV感染后的蛋白表达量分析-临床兽医学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自 独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自 己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人 发表或撰写过的研究成果，也不包含在江西农业大学或其它教育机构获得学位或证书面使用过的 材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有 严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位论文作者亲笔签名：燃日期： 论文使用授权的说明 本人完全了解江西农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件 和电子版，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文。 保密，在——年后解密可适用本授权书。口 不保密，本学位论文属于不保密。 口 (请在方框内打“妒’) 学位论文作者亲笔签名：垂墼垒涩 日期： 指导教师亲笔签名：：独日期： 万方数据 目 目 录 目 录 摘要 ．I ABSTRACT ．。。 ．．．． ．． ．．．，． ．．．． ．．．．．．．．．． ．．．． ．．．． ． ．．．。． ．．．．． 。。．．．．．．．． ．． 。。II 英文缩略词表 ．III 前言 1 第一章文献综述 ．2 1黄嘌呤氧化酶 ．2 1．1 XOD的结构 2 1．2XOD在机体的分布 ．2 1．3XOD的应用 ．2 1．3．1XOD的生理功能 2 1．3．2XOD的先天免疫作用 3 1．3．3检测SOD活力 ．．3 1．3．4测定血清中无机磷 3 1．3．5提高利巴韦林的转化率 4 1．3．6鱼类新鲜度的测定 4 1．4XOD相关的研究进展 ．4 1．4．1XOD与疾病 4 1．4．2XOD抑制剂的开发 4 1．4．3XOD合成菌的选育 5 1．4．4XOD的纯化 5 2原核表达系统概述 5 2．1大肠杆菌表达载体的调控原件 ．．5 2．2大肠杆菌表达载体的类型 ．．6 2．2．1菲融合表达载体 6 2．2．2融合表达载体 6 2．2．3分泌表达载体 7 2．2．4表面呈现表达载体 7 2．2．5带伴侣蛋白的表达载体 7 2．3外源目的蛋白的表达形式 一8 3禽m的研究进展 ．．8 3．1 IBV的分型 一8 3．1．1 NIBV感染后的临床症状 ．8 3．1．2 NIBV感染后的病理变化 ．8 3．2 IB的预防与治疗 ．9 3．2．1iB的预防 9 万方数据 目 目 录 3．2．2IB的治疗 9 4本研究的目的和意义 一10 5研究内容与试验流程 一10 5．1研究内容 10 5．2试验流程 1 1 第二章鸡XOD的原核表达 12 1材料与方法 12 1．1主要试剂 12 1．2主要仪器设备 ．13 1．3试剂、培养基的制备 13 i．4琼脂糖凝胶电泳所需试剂的制备 13 1．5 SDS—PAGE试剂配制 ．14 1．6纯化试剂配制 14 1．7蛋白透析复性液的配制 15 1．7。1透析袋处理液 ～15 1．7．2透析复性液 一1 5 2实验方法 15 2，1鸡XOD的生物信息学分析 ．15 2．1．1鸡XOD信号肽位点的预测分析 15 2．1．2鸡XOD抗原肽端分析 15 2．1．3鸡XOD基因的稀有密码子分析 15 2．2克隆质粒PMD—XOD的构建 15 2．2．1引物的设计 一15 2．2．2鸡肝组织RNA的提取 1 6 2．2．3 cDNA的合成 ．．16 2．2．4XOD基因的PCR扩增 16 2．2．5XOD基因产物的纯化 ，16 2．2．6XOD基因的克隆 ．16 2．2．7连接产物的转化 一17 2．2．8克隆菌株的筛选和鉴定 ．．17 2．3表达载体pET-XOD的构建 ．．1 8 2．3．1原核表达载体和XOD基因的制各 18 2．3．2XOD基因与表达载体的连接 ．18 2．3．3连接产物的转化 一18 2．3．4表达菌株的筛选和鉴定 一18 2．4目的蛋白的诱导表达 19 2．4．1目的蛋白的诱导表达 ： ．19 2．4．2目的蛋白的大量表达 一19 万方数据 目 目 录 2．4．3目的蛋白表达形式的鉴定 ．．19 2．5目的蛋白纯化、复性及浓缩 19 2．5．1蛋白纯化条件的优化 ．．19 2．5．2目的蛋白透析复性及浓缩 ．．20 2．6 SDS—PAGE分析 20 3结果与分析 21 3．1鸡XOD的生物信息学分析结果 ．21 3．1．1鸡XOD信号肽端的预测分析结果 2l 3．1．2鸡XOD抗原肽端分析 ．．22 3．1．3鸡XOD基因的稀有密码子分析结果 22 3．2克隆载体PMD—XOD的构建 2