几种红树植物的遗传变异和抗盐特性的分子生态学研究-植物学专业论文.docx

几种红树植物的遗传变异和抗盐特性的分子生态学研究 几种红树植物的遗传变异和抗盐特性 的分子生态学研究 周涵韬 (厦门大学生命科学学院，厦门361005) 中文攮要 o 红树林(Mangroves)是生长于热带、亚热带陆海交汇的海湾河口潮问带的盐生木 本植物群落，它蕴藏着丰富的动植物、微生物基因库，是一种珍贵的生物资源。红树林在 维护海岸生态平衡；防风减灾、护堤保岸；环境污染监铡、挣化与防治等上发挥重要的作 用。目前国内外对红树植物开展了大量的生物学研究工作，成果多集中在生态学，生理学。生 物化学等领域，而分子生物学领域的研究工作还处于起步阶段。本文运用RAPD分子标记 技术，对不同种属红树植物的遗传变异与生态分化进行了研究；首次运用改进的 mRNA差别显示技术，从抗盐能力强的泌盐红树植物一白骨壤基因组中分离克隆了抗 1．采用改良的CTAB抽提方法，成功地从不同种属红树植物的叶片中提取和纯化 了基因组DNA。获得的DNA纯度较好(^m／^2。o在1．6-i．8之间)，得率高(平均得率 约为120u gDNA／g F．w．)，片段完整(片段大小约为23Kb左右)。适宜于进行PCR扩 增及后续分子生物学研究．说明本文首次在前人工作基础上加以改进的CTAB法，广 泛适用于富含单宁、多糖、脂类、胶质类物质等的红树植物基因组DNA的提取与纯 o 化。 RAPD扩增反应的稳定性、重复性及扩增带型的丰富性是进行红树植物遗传多样 性分析的基础．使用德国Biometra公司T3型PCR仪，规范实验操作，采用如下反应 体系：tommol／L Tris-HCI，pH8．0，50mmol／L KCl，O．01％明胶，80rig模板DNA， 2mmol／L MgCl2。0．2mmoi／L dNTPs，0．2 p mol／L 10核苷酸随机引物，0．5U Taq DNA聚合酶，总体积25uL。扩增程序为：94ac变性1ram，360c退火Imin，720c延 伸2rain，共进行40个循环，最后72。C延伸7rain。获得的RAPD扩增结果稳定性 高，重复性好，扩增带型丰富平均为6--7条． 2．以福建九龙江口龙海红树林自然保护区浮宫种苗园内白骨壤(Avicennia marina)、桐花树(Aegiceras corniculatum)、无瓣海桑(Sonneratia apeta]a)、 秋茄(Kandella cande∥、木横(Bruguiera gymnorrhlza)、海莲(Bruguiera sexangu]a)、尖瓣海莲(Bruguiera sezangu]a var．ghynchopeta]a)等7种红树植 物为材料，运用RAPD技术对这7种红树植物进行了遗传多样性分析．从30个lO核苷 酸随机引物中筛选出15个有效引物．利用这15个有效引物共扩增出630条DNA带， 其中多态性条带535，占总扩增条带的84．92％．利用Nei指数法得出7种红树植物问 的遗传一致度和遗传距离，并运用UPGMA统计分析法对红树植物的7个种间的亲缘关 的遗传一致度和遗传距离，并运用UPGMA统计分析法对红树植物的7个种间的亲缘关 系进行聚类分析，DNA分子分类系统图。7个种分为A、B两个大组，A组中包含三个 种，B组中包含四个种。白骨壤(马鞭草科)、桐花树(紫金牛科)、无瓣海桑(海桑科) 同属于A组。白骨壤与桐花树的遗传距离为0．58而与无瓣海桑的遗传距离为0．60， 无瓣海桑与桐花树的遗传距离达0．67。可见这三种红树植物虽然聚类在同一组。但由 于彼此之间的遗传距离较远(qz均0．63)，符合传统形态分类，三种红树植物属于不同 科；而同属红树科的秋茄、木榄、海莲、尖瓣海莲经分子聚类一起出现在B组，它们 的平均遗传距离为0．35，分子分类也表明它们聚类为同一科，属于科内属种间关系。 相对于秋茄而言，木榄、海莲和尖瓣海莲这三者的亲缘关系更近，平均遗传距离为 0．28，属于属内种问关系。这和传统的分类学相吻合。由此表明RAPD分子标记技术能 较为客观地反应出红树植物的遗传多样性及其相互间的亲缘关系。 3．进一步以海南东寨港红树林自然保护区中，红树(肋izophora apiculata)、 红海榄(Rhizophora stylosa)、秋茄(Kandelia candeD、角果木(Ceriops tagal)、木揽(BruguJera gy=norrhlza)、海莲(Bruguiera sexangula)、尖瓣海 莲(Bruguiera sexangu]a vsr．rhynchopeta]a)等红树科7种红树植物为材料，通 过已筛选出的15个有效引物进行RAPD分析，获得了红树科7种红树植物的遗传分类 关系。15个有效引物共扩增出617条DNA带，其中多态