课件：维生素临床知识与产品培训.ppt

四、实验过程中注意事项（各项操作严格按照说明书进行） 加标本：一般用精确的微量加样器，将所加物贴壁加在板孔的底部1/3处，避免加在孔壁上部，并注意加样用力的均匀性和手法的统一性，不可溅出，不可产生气泡。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染；干吸头预先在血清中抽吸二三次 （2）维生素D3检测注意事项 四、实验过程中注意事项（各项操作严格按照说明书进行） 加酶标液与TMB时：为避免污染应弃掉第一管，加样时滴头应在微孔中部的上方，避免与微孔板边缘或其中的试剂接触即“垂直而不碰壁” 加显色液时，避免吸头接触孔避及孔内样本。如有，必须更换吸头，以防污染试济影响结果。并加贴封片。 加完终止液后，必须在5分钟内读取OD值，否则因反应孔内沉淀影响结果 （2）维生素D3检测注意事项 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 维生素D检测临床意义3-49 1、维生素D简介 2、维生素D生理功能 3、维生素D与疾病 维生素D检测指南与方法50-70 1、维生素D检测指南 2、维生素D检测方法 博晖维生素D试剂盒介绍71-115 博晖公司维生素D3检测原理 维生素D3检测试验准备与流程 维生素D3检测试验步骤与数据分析 维生素D3检测操作规范及注意事项 脂溶性维生素 特点 溶于脂肪及脂溶剂，而不溶于水； 在食物中与脂类共同存在； 在肠道吸收时随淋巴系统吸收，从胆汁少量排出； 摄入后，大部分储存在脂肪组织中 缺乏症状出现缓慢； 有的大剂量摄入时易引起中毒。 ， 1、住在都市的人，特别是浓烟污染的地域的人应该摄取更多的维生素D。 2、夜间工作者、煤矿工人，办公室白领不能充分得到阳光的人要特别注意在饮食中增加维生素D的摄取。 3、正服用抗痉挛的药物，则必须增加对维生素D的摄取。 4、饮用未添加维生素D牛奶的小孩必须增加维生素D的摄取量。 5、皮肤颜色较黑且住在北方气候地域的人需要更多的维生素D。 巴比妥类安眠药，抗癫痫药大仑丁，会造成维生素D缺乏 统计资料表明，骨质疏松性骨折的发生部位多发部位为：椎体骨折为38%，髋部骨折为19%，前臂骨折为19%，可看出椎体骨折的发生率最高。 25（OH）D是血液循环中维生素D最主要的存在形式，半衰期2~3周，是监测维生素D状态的最佳指标。 1,25（OH）2D在血液中浓度比25（OH）D低1000倍，半衰期约4小时，且对PTH、钙、磷的调控非常敏感，1,25（OH）2D不能反映维生素D的储备水平，血清1,25（OH）2D在维生素D缺乏时经常是正常的甚至升高，因此检测其浓度对于监测病人的维生素D的状态没有帮助。 * 酶联免疫吸附剂测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA---[enzaim] ：[?sei] ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性 * 例如： * 在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。 * 校准品、质控品、样品均被样品稀释液稀释是样本准备。 辣根标记的25羟基维生素D3抗原-即是酶标抗原 包被了鼠单克隆抗体的微孔即是 固相的抗体 稀释的样本是待测VD3 TMB是显色剂，能在酶催化下反应显色 酶标仪测定的吸光度与酶催化的显色成正比，显色越明显，说明酶越多，酶标记的抗原即酶标记的VD3越多 因我们采用竞争法，所以显色越浅，说明待测样本中VD3越多 * 最好具备全套加样器或 移液器，常用的50、100、200、，10ul需特殊配备枪头，1000ul特大枪头 没有洗板机，需专业学习手动洗板方法 * 移液器： 1、选择量程和移液器最靠近或接近的； 2、吸取液体时，移液器要垂直，慢进慢出 3、同一溶液多次加样，若碰到样孔内壁，必须换枪头 * 维生素D3测试，大约要3小时，其中复溶干粉及混匀和恢复常温约20分钟，试剂准备-调制标准液体、质控液、样本液约15分钟。往包被板中加标准液、质控液、样本液、酶工作液（48孔为例）约20分钟。温育1小时，洗板干燥约15分钟，加底物约20分钟，温育15分钟，加终止液10分钟，测量1分钟共计约3小时。 * 注意：配制不同浓度的标准溶液就是变相的稀释部分4号标液，只需要4号标液和样本稀释液按不同比例混合，理解为主 * 在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。 指数方程下，Y代表OD值。 反过来，对数方程下，X代表OD值。 * * * 在“添加趋势线”选项卡中 –类型 选择 指数 选项中 选择 显示公式 显示R平方值 然后点击确定 * 显示的方程式一个指数方程，X代表横轴 代表液体浓度 Y代表浓度对应的