课件：细胞培养研究生实习课课件韩汶延.pptxVIP

细胞培养  技术 临床医学研究中心 韩汶延 细胞培养技术 －在现代医学和生物科学研究中应用广泛 第一节 基本知识 第二节 细胞生存环境、条件和代谢 第三节 基本技术（见视频） 第一节 细胞培养的基本知识 一、细胞培养的基本概念 二、培养细胞的类型及其特点 三、培养细胞的增殖过程 细胞培养cell culture（组织培养 tissue culture）概念 从生物体内取出细胞或组织，在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下进行孵育培养，使之生存和生长并维持其结构和功能的技术。 始于20世纪初（1907年Harrison，1912年Carrel） 凹窝玻璃悬滴培养法 细胞培养的目的与用途 科学研究：药物研究开发与基础研究 1、新药筛选； 2、疫苗研究与开发； 3、基因工程药物研究与开发； 4、细胞工程药物研究与开发； 5、单克隆抗体制备； 6、药物作用机理； 7、基因功能研究； 8、疾病发生机制研究 对细胞（组织）培养的评价 ＊＊优点 1、直接观察活细胞的形态结构和生命活动。 2、便于用各种不同技术方法研究细胞。 3、培养细胞携带有体内细胞同等的基因组。 4、同时提供大量的生物学性状相似的实验对象。 ＊＊缺点 组织和细胞离体后独立生存在人工的培养环境中，虽然模拟体内环境，仍有很大差异。 因而利用培养细胞做实验时，不应视为体内细胞完全相同，把实验结果推测体内，轻易做出与体内等同的结论。 体内、外细胞的差异 体内细胞： 机体神经体液调节 和其他类型细胞影响 基因表达受到外来信号调节 增殖过程中不断发生着分化 （由一般到特殊） 体外细胞： 失去机体神经体液调节和 其他类型细胞影响 细胞的许多外来信号被切断 特定分化基因表达减弱或停止 而进化中保守的增殖活动维持 （由特殊到一般） 与体内细胞结构和功能的差异 特征：失去原有形态，分化特性减弱 形态和功能趋于单一 一定代数后衰老死亡， 或发生转化， 获不死性而成为能无限传代 高度特化的结构和功能 培养细胞的类型及其特点 培养细胞的形态分类 根据是否附于支持物上生长的特性，分为贴附型和悬浮型。 1、贴附型 细胞贴附在支持物表面生长，只依赖贴附才能生长的细胞叫做贴附型细胞（Anchorrage-dependent cells）。大多数细胞属此型。失去在体内特有形态。 成纤维细胞型、上皮细胞型、游走型、多形型 成纤维细胞 人肾小管上皮细胞 多形型黄色瘤细胞 游走型巨噬细胞 2、悬浮型细胞（suspended cell type） 悬浮生长，单个分散或成团。各种源自血液的细胞、骨髓、脾细胞。 培养细胞的增殖过程 细胞增殖 细胞分裂形成子代细胞的过程。 增殖周期： 间期（ G1-S-G2 期）和有丝分裂期（M期） 群体中多数细胞处于间期，少数处于分裂期 间期持续时间较长，分裂期较短。 培养细胞的生命期 定义: 细胞在培养中持续增殖和生长的时间。一般可分为原代培养期、传代期和衰退期. 原代培养：从体内取出细胞接种后到第一次传代。一般维持1－4周。 细胞系：原代细胞一经传代就成为细胞系（Cell line），进入传代期。此期在全生命期中持续时间最长，一般传10－50代。随后细胞增殖缓慢以至完全停止，细胞进入衰退期。(Hayflick 极限的概念) 衰退期：细胞增殖缓慢以至完全停止，细胞死亡。 肿瘤细胞：无限细胞系，永久增殖。 Hayflick极限 体外培养的细胞增殖能力不是无限的，传代次数有一定的界限，称为“ Hayflick极限”。 传代次数与物种寿命有关：小鼠寿命3年，传代12次；龟寿命200年，传代140次。 传代次数与个体年龄成反比：人胚胎，40-60代； 幼年，20-40代；成年，10-30代；早老病儿童，2-10代。 培养细胞一代的增殖过程 传代： 培养容器中细胞增殖至一定密度后，分离出一部分细胞和更新营养液的过程 一代: 细胞接种后到下一次传代的一段时间 细胞一代的三个阶段： 潜伏期、指数增生期、平台期 实验研究多在指数增长期进行 第二节 细胞生存环境、条件和代谢 ---培养的细胞生存途径和物质代谢与体内细胞基本相同，随生存环境改变出现一定差异。 （一）环境 培养环境无毒和无菌是保证培养细胞生存的首要条件。保证细胞生存环境无任何污染、代谢物及时清除，是维持细胞生存的基本条件。 (二)温度： 人哺乳动物：36.5℃±0.5℃; 鸟类：38.5℃;