甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981增殖和细胞周期的影响及其分子机制的研究-临床医学(肿瘤内科学)专业论文.docx

声 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机 构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡 献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的，论文成 果归四川大学所有，特此声明。 七年制学生：辟晚塞 导师闲辫 2006年5月5日 甲基硒酸对L9981增殖和细胞周期的影响及其分子机制 甲基硒酸对L9981增殖和细胞周期的影响及其分子机制 研究生：钟晓蓉导师：周清华 甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981增殖 和细胞周期的影响及其分子机制的研究 研究生：钟晓蓉 导师：周清华教授 摘要 背景与目的 肺癌是当今世界上对人类健康和生命危害最大的恶性肿 瘤。近半个世纪以来，尽管各种肺癌治疗手段不断发展，但遗憾的是包括我国 在内的绝大多数国家肺癌的疗效并无明显提高，肺癌总的治愈率仍低于15％。 因此研究和开发抗肺癌的有效新药物仍是肿瘤领域的重要任务。自20世纪70 年代以来，人们逐渐注意到必需微量元素硒及其化合物的防癌抗癌作用。国内 外学者进行了大量的流行病学研究和基础研究，发现硒及其不同形式的化合物 能够降低包括肺癌在内多种肿瘤的发病率，也能够明显抑制乳腺癌、前列腺癌 等细胞株体外增殖能力，并可以通过多种机制导致癌细胞周期阻滞而影响细胞 增殖。这无疑也为开发抗肺癌新药提供了新的思路。目前在硒的体外研究中， 甲基硒酸(methylseleninic acid，MSA)可能是最有希望的硒化合物。因为被细 胞摄取后，MSA可以通过非p裂解酶途径(p裂解酶在体外细胞中表达水平受 限)，持续稳定地转化为甲基硒(甲基硒抑制细胞生长的能力最强，但该化合物 非常不稳定)，故MSA的抗癌效能强于其他依赖于13裂解酶代谢途径的硒化合 甲基硒酸对L9981增殖和细胞周期的影响及其分子机制 甲基硒酸对L9981增殖和细胞周期的影响及其分子机制 研究生：钟晓蓉导师：周清华 物，如无机硒化合物或硒．甲基硒代半胱氨酸等。 迄今，有关甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的抗癌作用及其 分子机理的研究国内外均无报道。故本研究应用MSA处理人高转移大细胞肺癌 细胞株L9981，旨在初步探讨甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981是 否具有生长抑制、细胞周期阻滞作用及其可能的分子机制。 方法本研究应用体外细胞培养技术，通过台盼蓝计数法观察MSA对人 高转移大细胞肺癌细胞株L9981生长曲线的影响，平板法克隆形成实验观察 MSA对L9981肺癌细胞株克隆形成能力的影响，流式细胞术检测MSA对L9981 肺癌细胞株细胞周期分布的影响以及周期相关基因p53和p21表达水平的变化。 结果本研究在国内外首次观察到：(1)MSA可显著抑制人高转移大细胞 肺癌细胞株L9981的体外增殖能力，并具有剂量依赖性，0．5、2．5、5．0和7．5turtol／L MSA组L9981细胞株的体外增殖能力均显著低于对照组(PO．05或P0．01)： 5．0“mol／L MSA抑制L9981细胞株体外增殖能力的作用类似于2．51．tg／mlDDP (8．39mol／L DDP)的抑制作用：(2)MSA浓度在2．5、5．0和7．59mol／L时可显 著抑制L9981的克隆形成能力(P0．05)，并具有剂量依赖性：(3)MSA能将人 高转移大细胞肺癌细胞株L9981阻滞在GI／G0期，MSA的这种阻滞作用具有 时间依赖性；(4)MSA能将人高转移大细胞肺癌细胞株L9981阻滞在G2／M期， MSA的这种阻滞作用具有剂量依赖性；f5)MSA能显著上调人高转移大细胞肺 癌细胞株L9981 p53和p21表达水平(PO．01)，并具有明显的剂量依赖性。 结论 (1)MSA可显著抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的体外 增殖能力，并具有剂量依赖性，可将细胞阻滞于G0／G1期和G2／M期；(2)MSA 可显著抑制L9981肺癌细胞株的体外克隆形成能力，并呈剂量依赖性；(3)MSA 的抗肺癌作用可能与其上调L9981肺癌细胞株p53和p21基因表达水平有关。 甲基硒酸对L9981增殖和细胞周期的影响及其分子机制 甲基硒酸对L9981增殖和细胞周期的影响及其分子机制 研究生：钟晓蓉导师：周清华 关键词 甲基硒酸人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 生长抑制细 胞周期 3 !至堕墼!!—塑!!望丝塑塑塑旦塑塑墅堕丝基坌三垫型 !至堕墼!!—塑!!望丝塑塑塑旦塑塑墅堕丝基坌三垫型 型塞皇!塑些篓量墅：旦堕兰 Effects of Methylselen