激素对兔骨髓间充质干细胞神经递质表达的影响-骨外科专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的科研成果。对本人的研究作出重要贡献的个人和集体， 均已在文中以明确方式表明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者。蚴：弘庶 日期：1％月／日 学位论文使用授权声 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大 学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有 关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权 郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、 使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍 然为郑州大学。 学位论文作者(签名)：；旷荔谚 吼叫}年石月／日 摘要激素对兔骨髓间充质干细胞神经递质表达的影响 摘要 激素对兔骨髓间充质干细胞神经递质表达的影响 研究生 张鑫 导师 王义生 郑州大学第一附属医院骨外科河南郑州450052 摘要 背景与目的：由于激素在临床上的广泛应用和医学水平的不断发展，激素所致 的股骨头缺血性坏死(osteonecrosis ofthe femoral head，ONFH)表现出逐年增 加趋势，现已占非创伤性股骨头坏死首位。但该病的确切发病机制现仍未完全清 楚。 近年来的研究发现，在骨髓腔中除了造血干细胞之外，还存在着一种具有 多向分化潜能的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs)，其在特定条件下能够分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞及神经 细胞等，这种分化受多种神经递质的影响。已有实验证明大剂量激素不仅会诱 导BMSCs向脂肪细胞分化，还能够影响骨内神经纤维中递质的表达，进而使 组织的成骨及成血管作用下降，导致组织内骨细胞和血管的形成及修复能力降 低，引起骨和血管组织的损伤以及凝血机制的改变，最终发生股骨头缺血性坏 死。目前已有研究表明，激素能够影响动物体骨组织内神经递质在神经纤维中 的表达，而本实验则主要通过体外分离培养兔BMSCs，以10。7mol／L地塞米松 进行诱导，采用分子生物学检测方法，观察激素对BMSCs中多种神经递质或 其受体表达的影响，以及这种影响与成骨分化的关系，从而进一步探讨激素性 ONFH的发生机制。 材料与方法：取兔四肢长骨骨髓，经密度梯度离心和贴壁培养后，获得原代 BMSCs，将传代培养的第3代问充质干细胞随机分为两组，实验组培养基中加 入浓度为10’7mol／L地塞米松，对照组则正常培养。分别于诱导后第4，7，1l， 15天提取RNA，运用荧光定量PCR技术测定细胞中神经生长因子(nervegrowth factor，NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrocyte growth factor,bFGF)、 降钙素基因相关肽受体(calcitontin gene．related peptide receptor,CGRPR)、P物 摘要质受体(substance 摘要 质受体(substance P receptor,SPR)、血管活性肠肽受体(vasoactive intestinal peptide receptor,VIPR)和成脂转录因子过氧化物酶体增殖子活化受体．丫 (peroxisom proliferator-activeted receptor-7，PPARV)mRNA表达，并在诱导第 14天检测培养液中骨钙素(osteocalcin，OC)含量和细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性。 结果：实验组内NGF、FGF、CGRPR、SPR、VIPR mRNA表达，以及ALP活 性和OC含量均较对照组明显降低，而PPARy mRNA表达较对照组明显增高， 差异均具有统计学意义(P0．01)，而实验组在不同时间点间各因子进行比较 却无明显差异(PO．05)。 结论：大剂量激素可导致BMSCs中具有成骨功能的神经递质或其受体表达下 降，进而抑制成骨发生，这可能是激素性ONFH的发生机制之一。 关键词： 激素股骨头坏死神经递质骨髓间充质干细胞骨化 Abs仃actEffects Abs仃act Effects of steroid on the expressions of neurotransmitters in bone marrow mesenchymal stem cells of rabbit Postgr