化妆品毒理检验的审查要点及评价3体外细胞染色体畸变.docVIP

化妆品备案毒理学检验的审查要点及评价 （三） 在化妆品备案申报时，产品都要在国家认可的检验机构按照《化妆品卫生规范》的要求进行检验。虽然这些试验的具体操作都由检验机构来完成，但如果申请企业的研发申报人员能够对主要试验方法、审查要点和评价标准有一个大致的了解，对研究产品配方、调整产品工艺及把控产品质量都会有所帮助。下面北京天健华成国际投资顾问有限公司化妆品注册部就主要的毒理试验帮大家进行简单的梳理，供您参考。 化妆品备案毒理学检验之 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 试验方法 阴性对照： ◆ 原则上为溶剂对照，即仅含和受试物组相同的溶剂，不含受试物，其它处理和受试物组完全相同◆ 如未能证实所选溶剂不具有致突变性，溶剂对照与本实验室空白对照背景资料有明显差异，还应设空白对照◆ 溶剂必须是已知非致突变物或实验证明为非致突变物阳性对照： ◆可根据受试物的性质和结构选择适宜的阳性对照物， 阳性对照物必须是已知断裂剂， 能引起可检出的、 并可重复的阳性结果 ◆当活化系统不存在时， 可使用甲磺酸甲酯 (MMS) 、甲磺酸乙酯(EMS) 、 乙基亚硝基脲(ethyl nitrosourea)、丝裂霉素C(mitomycin C)、 4-硝基喹啉-N-氧化物（4-nitroquinoline-N-oxide）◆当活化系统存在时， 可使用苯并（a） 芘[benzo(a)pyrene]、环磷酰胺(cyclophosphamide)。受试物的配制--溶剂的选择： ◆溶剂必须是非致突变物，不与受试物发生化学反应，不影响细胞存活和S9活性◆首选溶剂是培养液（不含血清）或水。二甲基亚砜（DMSO）也是常用溶剂，使用时浓度不应大于0.5%。受试物的配制—确定最高浓度的决定因素体： ◆细胞毒性 ◆受试物在试验系统中的溶解度◆pH或渗克分子浓度(osmolality)的改变 细胞毒性的确定： ◆应使用指示细胞完整性和生长情况的指标，在活化系统存在或不存在的两种条件下确定细胞毒性◆ 细胞覆盖程度（degree of confluency）、存活细胞计数(viable cell counts)或有丝分裂指数(mitotic index)◆降低程度 ? 50%难溶物质： ◆当浓度不低于不溶解浓度时仍无毒性， 则最高剂量应是， 当处理期结束时， 在最终培养液中溶解度限值以上的 一个浓度。在某些情况下（即仅当高于最低不溶解浓度时才发生细胞毒性） ，应使用一个以上可看见沉淀的浓度◆最好在试验处理开始和结束时均评价溶解度， 因为由于细胞、 S9等的存在， 在试验系统内在暴露过程中溶解度可能变化◆不溶解性可用肉眼鉴别， 但沉淀不能影响观察。相对无细胞毒性的化合物： ◆ 最高浓度应是5μl/mL，5mg/mL或0.01mol/L剂量设置： ◆ 至少应设置3个可供分析的浓度(+S9,-S9)◆ 有细胞毒性时，其浓度范围应包括从最大毒性至几乎无毒性◆ 通常浓度间隔系数不大于2-√10读片： ◆ 每一处理组选200个（阳性对照可选100个）分散良好的中期分裂相（染色体数为2n±2）进行染色体畸变分析◆ 在分析时应记录每一观察细胞的染色体数目，对于畸变细胞还应记录显微镜视野的坐标位置及畸变类型统计处理： 对染色体畸变细胞率用X2检验结果评价：◆ 受试物引起染色体结构畸变数的增加具有统计学意义，并有与剂量相关的增加◆ 受试物在任何一个剂量条件下，引起具有统计学意义，并有可重复性的阳性反应◆ 在评价时应把生物学和统计学意义结合考虑结果判定：◆试验结果呈现阴性，为合格试验报告审查要点： (1) 受试物名称、有关的理化性状、 所用溶剂及其配制、剂量选择（应说明受试物对细胞毒性的测定方法、溶解情况等）；(2) 细胞株名称；(3) 实验条件和方法(4) 结果 ①受试物最高剂量的确定及结果 ②试验结果 ③阳性对照组和阴性对照组(5) 结论结果解释： ◆ 阳性结果表明受试物引起培养的哺乳动物体细胞染色体结构畸变。◆ 阴性结果表明在本试验条件下，受试物不引起培养的哺乳动物体细胞染色体结构畸变致突变性试验结果的评价 ◆育发类、健美类、美乳类产品：鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验和体外哺乳动物细胞染色体畸变试验均为阴性，可予以通过。◆染发类产品：鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验和体外哺乳动物细胞染色体畸变试验均为阴性，予以通过。鼠伤寒沙门氏菌/回复突变试验为阳性，可选作体外哺乳动物细胞基因突变试验，结果为阴性，可予以通过。