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分子生物学课件—原核表达调控-2.ppt 61页

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色氨酸操纵子代表了一种衰减调控模式 在trp操纵子上,弱化子的转录终止作用取决于色氨酸的浓度。a. 高色氨酸条件下,序列3和4配对,形成转录终止发夹。b. 低色氨酸条件下,核糖体停在色氨酸密码子附近,序列1被核糖体覆盖,序列2和3配对,因此阻止了3、4之间形成转录终止发夹。c 没有蛋白合成时,如果没有核糖体起始先导肽的翻译,序列1、2形成发夹,阻止了2、3发夹的形成,允许序列3、4形成转录终止发夹,酶不表达。 实验证据 转录弱化理论得到了大量实验证据的支持:(1)影响区段3和区段4二级结构稳定性的突变以及改变区段4后面一串U的突变都会降低弱化子的终止作用,增加trp操纵子的表达,这与终止子的突变效应是一样的;(2)相反,影响影响区段2和3配对的突变,则增加弱化子的弱化作用;(3)如果前导肽的起始密码子发生错义突变,前导肽的翻译就不能起始,有利于前导RNA形成1-2、3-4二级结构,则转录必定在弱化子处终止。 ? 有实验证明,在不加色氨酸的培养基中,trp mRNA的合成仍然受到部分阻遏,现在一般认为,野生型细胞中同时存在着有活性和无活性的阻遏物,培养基中色氨酸浓度的变化,能够使这两种阻遏物间的平衡发生倾斜,最终做出关闭或启动trp操纵子的决定,从而维持一定的色氨酸含量。 4.2.3 阻遏与弱化作用的协调 细菌中为什么需要弱化子系统呢? 一种可能是阻遏物从有活性向无活性的转变速度较慢,需要一个能更快地做出反应的系统,以保持培养基中适当的色氨酸水平。或者,弱化子系统主要是对外源色氨酸浓度做出反应。外源色氨酸浓度很低的信号虽然足以引起trp操纵子的去阻遏作用,但是这个信号还不足以很快引发内源色氨酸的合成。在这种环境下,弱化子就通过抗终止的方法来增加trp基因表达,从而提高内源色氨酸浓度。 ? 那么为什么还要有阻遏体系呢? 没有阻遏体系,只有弱化,似乎也可以调节色氨酸酶系的合成。目前认为阻遏物的作用是当有大量外源色氨酸存在时,阻止非必需的先导mRNA的合成,它使这个合成系统更加经济。 事实上,自然界存在着不同类型的合成体系,例如组氨酸操纵子拥有在功能上与trp操纵子完全相同的弱化子结构,但没有阻遏物,它的表达完全受弱化子调节。 在trp操纵子中,阻遏蛋白的负调控起到粗调的作用,而衰减子起到细调的作用。 细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的不足,因为阻遏作用只能使转录不起始,而对于已经起始的转录,只能通过弱化作用使之中途停顿下来。阻遏作用的信号是细胞内色氨酸的多少,弱化作用的信号则是细胞内载有色氨酸的tRNA的多少,通过前导肽的翻译来控制转录的进行。 细菌细胞内这两种作用相辅相成,体现着生物体内周密的调控作用。 5.1 半乳糖操纵子 (galactose operon) Galactose operon包括3个结构基因(gal E、gal T、gal k)表达产生的异构酶(UDP-galactose-4-epimerase)、半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶(galactose transferase)和半乳糖激酶(galactose kinase)参与Gal代谢,形成UDPGal,用于合成细胞壁。 5.1.1 半乳糖操纵子的结构及特点 激酶K UDP转移酶T 差向异构酶E 半乳糖 半乳糖+葡萄糖 半乳糖-1-磷酸 乳糖 UDP-葡萄糖 UDP-半乳糖 葡萄糖 UDP转移酶T 细胞壁 当细胞中缺乏葡萄糖时,这些酶可使Gal转变成G-1-P,供细菌生命活动需要。 gal操纵子属于诱导型操纵子。调节基因galR距离结构基因galE、T、K及操纵区O等很远,而galR产物对galO的作用与lacI-lacO的作用相同。Gal是gal操纵子的诱导物。Gal的跨膜运输需要galP基因产物的参与。 gal操纵子的特点: ① 它有两个启动子,相距仅5bp,每个启动子拥有各自的RNA聚合酶结合位点S1和S2。其mRNA可从两个不同的起始点开始转录; ② 有两个O区,一个在P区上游-67—53(OE),一个在结构基因galE内部(OI)。 ③ cAMP-CAP位点在-24~-50之间。 gal操纵子有两个相互重叠的启动子,可从两个不同的起始点(S1、S2)开始转录; gal操纵子有两个O区,一个在P区上游-67~53,另一个在结构基因galE内部。 gal P1的转录起始依赖于CRP,属于CRP激活型,因此只有培养基中无葡萄糖时才能进行转录,RNA聚合酶与S1的结合需要半乳糖和CRP。 高水平的CRP能抑制gal P2的转录起始,属于CRP抑制型。因此它完全依赖于葡萄糖。 即:当有CRP时,转录从S1开始,当无CRP时,转录从S2开始。 葡萄糖存在时 若无Gal,Gal R可结合在gal OE和OI上

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