1组织学技术简介.ppt

5.细胞培养术（cell culture） 把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养；培养组织块或器官则称组织培养术或器官培养术 用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响 用相差显微镜观察 体外培养的HeLa细胞 体外培养的平滑肌细胞 （免疫组织化学染色显示肌动蛋白） 6.组织工程（tissue engineering） 用细胞培养术在“体”外模拟构建机体组织或器官的技术。 研究包括四个方面： ① 种子细胞，即增殖旺盛的细胞，多为干细胞 ② 细胞外基质，可用生物材料（如牛胶原）和人工合成高分子材料 　 ③ 构建组织或器官，即把细胞置于细胞外基质中进行三维培养、并形成所需要的形状　 ④ 将构建物移植机体的方法 正在构建的有皮肤、软骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等；其中以组织工程皮肤较为成功，已成为商品用于治疗烧伤、皮肤静脉性溃疡等疾病 实验中的组织工程耳 7.图像分析术（image analysis） 图像分析术又称形态计量术（morphometry），是应用数学和统计学原理对组织切片提供的平面图像进行分析，从而获得立体的组织和细胞内各种有形成分的数量、体积、表面积等参数,从量的角度显示结构与功能的关系。目前广泛应用的图像分析仪可快速准确地测量组织切片和电镜照片中的微细结构，通过软件程序获得各项数据；也可以测量组织化学染色切片，根据染色深浅而提供该物质含量的相对数值。 根据连续的组织切片应用计算机进行三维重建，以获得可供研究的微细结构的立体模型，这部分内容称为体视学（stereology）。 1 Ⅰ型(球形、椭球形和盘状)线粒体 2 Ⅱ型(杆状)线粒体3 Ⅲ型(不规则形)线粒体4 Ⅳ型(分支形)线粒体 5 Ⅴ型(出芽形)线粒体 线粒体三维重建模型 END 第二章 组织学基础第一节 组织学技术简介Introduction of Histology 组织的概念 形态相似、功能相近的细胞与细胞间质结合在一起，形成组织。 动物体四类基本组织： 上皮组织 结缔组织 肌肉组织 神经组织 问题 解决方法 提高分辨率 显微镜 保持组织的原始构造 化学固定 透光 切片、涂片、铺片、磨片 增加反差 染色 区别不同生化成分 组织化学、放射自显影、 原位杂交 观察生活状态 培养 组织学技术简介 1.光镜技术（light microscope） 2.组织化学术（histochemistry） 3.电镜技术（electron microscopy） 4.放射自显影术（autoradiography） 5.细胞培养术（cell culture） 6.组织工程（tissue engineering） 7.图像分析术（image analysis） 一般光镜技术中常用三种制片方法 １．涂片法　液体材料，如血液、精液、各种分泌物、液体培养物等 ２．铺片法　易撕成薄片的材料，如疏松结缔组织 ３．切片法　将材料经处理后切成薄片 1.光镜技术 ①取材和固定 ②脱水和包埋 ③切片和染色 ④封片 普通组织切片制作过程 组织结构的立体形态与断面形态 材料块适宜大小（0.5cm3） 应用各种方法使组织标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定。 固定的目的和机制： ①使蛋白质凝固，终止或减少分解酶的作用，防止自溶，保存组织、细胞的离体前结构状态，包括保存组织或细胞的抗原性，使抗原不失活，不发生弥散。 ②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病 理性蓄积物，维持病变的特异性特征。 ③使上述物质转为不溶解状态，防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。 ④起助染作用。 固定（fixation） １．物理学方法　如低温冷冻，干冰（dry ice，即固态无水碳酸）冰冻真空脱水，石蜡渗入法。 ２．化学方法　采用各种化学溶液作固定液，使组织细胞进入固定状态。 固定方法 固定时间 小标本（如胃粘膜等）2～4h， 大标本应置放12～24h。 常用固定液 １．10％甲醛． ２．中性甲醛液　甲醛（浓）：120ml，水：880ml，NaH2PO4·H2O：4g， 　　　　　　　　Na2HPO4：13g。 ３．AF液 95％乙醇：90ml，甲醛(浓)：10ml。 脱水：普通固定液大多是水溶液，必须先脱去组织内的水分，为浸蜡创造条件。脱水剂通常使用酒精。脱水的步骤是逐步升高酒精溶液的浓度