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分子生物学课件-3.DNA和染色体结构.ppt 75页

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3.DNA 和染色体结构 The structure of DNA and chromosome 细胞的遗传物质:DNA、RNA 作为遗传物质的DNA具有以下特性: 储存并表达遗传信息 能把遗传信息传递给子代 物理和化学性质稳定 有遗传变异的能力 一些病毒和类病毒以RNA作为遗传物质。 DNA的结构有一级、二级、三级之分。 3.1.2 DNA二级结构及其多态性 3.1.2.1 B-DNA 模型的结构特征 3.1.2.2 维持双螺旋结构稳定的作用力 3.1.2.3 DNA二级结构多态性 ? ? ? ? ? DNA A helix right handed 11 residues/turn diameter 23 ? pitch 28 ? 3.1.2.4 DNA二级结构动态性 在天然DNA分子中,以B-DNA为主,同时可能存在其它类型的结构形式,即DNA分子的基本结构是B型,但在这个分子的某些区段会出现A-DNA、Z-DNA、甚至是三链、四链,并且这些不同的结构处于动态变化中,也就是说,条件不同,各不同结构之间还会相互转变造成相应的功能发生变化。 水合B-DNA中加入乙醇或盐后,DNA脱水就会变为A-DNA. 转录过程中,在DNA单链上合成RNA时,DNA同RNA的杂交链就是A型双螺旋结构。 阳离子条件下交替的GC区段处于B型结构,在胞嘧啶被甲基化后转向Z型。 3.1.2.5 DNA结构的呼吸作用 双螺旋的呼吸作用 双链DNA中配对碱基的氢键不断处于断裂和再生状态中,出现瞬间的单链泡状结构的现象。 3.1.3.1 DNA的三股螺旋和四联体结构 The model of DNA Tetraplex 四联体螺旋结构,有鸟嘌呤(G)之间的氢键所维系,故又称G四联体螺旋(G-quardruplex),结构基本单元是G四联体。 存在:真核生物染色体末端的端粒中 端粒DNA的序列在染色体末端的维持及复制中起重要作用,参与端粒DNA的复制,在染色体组装、减数分裂、有丝分裂中起中介作用,并使染色体的结构得以稳定。 3.1.3.2 DNA超螺旋结构 超螺旋结构的生物学意义: 超螺旋DNA形状更紧密,在DNA组装中有重要作用。 DNA超螺旋程度的变化介导了DNA结构的动态性,更利于DNA行使其功能。 DNA、RNA结构比较 3.2 DNA denaturalization、 DNA renaturation and nucleic acid hybridization DNA变性、复性、及核酸分子杂交 在物理化学因素影响下,维系核酸二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏,DNA双链解旋成单链的过程。 不涉及核苷酸中磷酸二酯键的断裂。 DNA变性后的变化: 260nm处的紫外吸收值增高——增色效应 黏度下降 沉降速度增加 浮力密度上升 双折射现象消失 酸碱滴定曲线改变 生物活性 引起DNA变性的主要因素有: 加热(生理温度以上): 260nm紫外吸收值明显上升。 PH值:过高或过低影响氢键的形成 有机溶剂:尿素和甲酰胺使DNA分子处于单链状态。 热变性 ——加热引起的变性。 Tm值是一半的DNA双螺旋解为单链所对应的温度,又称熔解温度或解链温度(melting temperature)。 Tm不是常数,受以下因素的影响: DNA的碱基组成:G-C含量高→Tm高 DNA均一性:序列组成越均→Tm高 溶液离子强度:阳离子强度越高→Tm高 RNA的变性 RNA分子只形成局部的双螺旋,因此RNA的变性参数没有DNA明显。 3.2.2 DNA renaturation DNA复性 复性(renaturation): 变性的DNA重新恢复为双螺旋结构的过程,又称退火。 复性不是变性的简单逆过程,复性后:260nm处的紫外吸收值降低 ,即减色效应。 影响DNA复性速度的因素 DNA变性和复性原理的应用 PCR 核酸分子杂交 3.2.3 Nucleic acid hybridization 核酸分子杂交 相同或不同来源的两个DNA分子,或DNA和RNA分子混合在一起,如果含有彼此互补的序列,通过变性和复性处理,DNA与DNA同源序列间及DNA与RNA异源序列间都可形成杂交体,称为核酸分子杂交(nucleic acid hybridization)。 有目的的人工制备或从基因组中 分离一段已知序列的DNA ↓ 标记DNA序列 ↓ 变性后成单链 ↓ 与待测DNA单链

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