分子生物学课件-3.DNA和染色体结构.ppt

3.DNA 和染色体结构 The structure of DNA and chromosome 细胞的遗传物质：DNA、RNA 作为遗传物质的DNA具有以下特性： 储存并表达遗传信息 能把遗传信息传递给子代 物理和化学性质稳定 有遗传变异的能力 一些病毒和类病毒以RNA作为遗传物质。 DNA的结构有一级、二级、三级之分。 3.1.2 DNA二级结构及其多态性 3.1.2.1 B-DNA 模型的结构特征 3.1.2.2 维持双螺旋结构稳定的作用力 3.1.2.3 DNA二级结构多态性 ? ? ? ? ? DNA A helix right handed11 residues/turndiameter 23 ?pitch 28 ? 3.1.2.4 DNA二级结构动态性 在天然DNA分子中，以B-DNA为主，同时可能存在其它类型的结构形式，即DNA分子的基本结构是B型，但在这个分子的某些区段会出现A-DNA、Z-DNA、甚至是三链、四链，并且这些不同的结构处于动态变化中，也就是说，条件不同，各不同结构之间还会相互转变造成相应的功能发生变化。 水合B-DNA中加入乙醇或盐后，DNA脱水就会变为A-DNA. 转录过程中，在DNA单链上合成RNA时，DNA同RNA的杂交链就是A型双螺旋结构。 阳离子条件下交替的GC区段处于B型结构，在胞嘧啶被甲基化后转向Z型。 3.1.2.5 DNA结构的呼吸作用 双螺旋的呼吸作用 双链DNA中配对碱基的氢键不断处于断裂和再生状态中，出现瞬间的单链泡状结构的现象。 3.1.3.1 DNA的三股螺旋和四联体结构 The model of DNA Tetraplex 四联体螺旋结构，有鸟嘌呤(G)之间的氢键所维系，故又称G四联体螺旋(G-quardruplex),结构基本单元是G四联体。 存在：真核生物染色体末端的端粒中 端粒DNA的序列在染色体末端的维持及复制中起重要作用，参与端粒DNA的复制，在染色体组装、减数分裂、有丝分裂中起中介作用，并使染色体的结构得以稳定。 3.1.3.2 DNA超螺旋结构 超螺旋结构的生物学意义： 超螺旋DNA形状更紧密，在DNA组装中有重要作用。 DNA超螺旋程度的变化介导了DNA结构的动态性，更利于DNA行使其功能。 DNA、RNA结构比较 3.2 DNA denaturalization、 DNA renaturation and nucleic acid hybridization  DNA变性、复性、及核酸分子杂交 在物理化学因素影响下，维系核酸二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA双链解旋成单链的过程。 不涉及核苷酸中磷酸二酯键的断裂。 DNA变性后的变化： 260nm处的紫外吸收值增高——增色效应 黏度下降 沉降速度增加 浮力密度上升 双折射现象消失 酸碱滴定曲线改变 生物活性 引起DNA变性的主要因素有： 加热（生理温度以上）： 260nm紫外吸收值明显上升。 PH值：过高或过低影响氢键的形成 有机溶剂：尿素和甲酰胺使DNA分子处于单链状态。 热变性 ——加热引起的变性。 Tm值是一半的DNA双螺旋解为单链所对应的温度，又称熔解温度或解链温度(melting temperature)。 Tm不是常数，受以下因素的影响: DNA的碱基组成：G-C含量高→Tm高 DNA均一性：序列组成越均→Tm高 溶液离子强度：阳离子强度越高→Tm高 RNA的变性 RNA分子只形成局部的双螺旋，因此RNA的变性参数没有DNA明显。 3.2.2 DNA renaturation  DNA复性 复性(renaturation)： 变性的DNA重新恢复为双螺旋结构的过程，又称退火。 复性不是变性的简单逆过程，复性后：260nm处的紫外吸收值降低 ，即减色效应。 影响DNA复性速度的因素 DNA变性和复性原理的应用 PCR 核酸分子杂交 3.2.3 Nucleic acid hybridization 核酸分子杂交 相同或不同来源的两个DNA分子，或DNA和RNA分子混合在一起，如果含有彼此互补的序列，通过变性和复性处理，DNA与DNA同源序列间及DNA与RNA异源序列间都可形成杂交体，称为核酸分子杂交(nucleic acid hybridization)。 有目的的人工制备或从基因组中 分离一段已知序列的DNA ↓ 标记DNA序列 ↓ 变性后成单链 ↓ 与待测DNA单链