分子生物学课件—真核表达调控.ppt

2 mRNA的加工成熟 编码蛋白质的基因转录产生mRNA。这类基因产物在转录后要进行一系列的加工变化，才能成为成熟的有生物功能的mRNA。 这些加工主要包括在mRNA的5'末端加"帽子"，在其3'末端加上poly(A)，进行RNA的剪接以及核苷酸的甲基化修饰等。由于mRNA的这些结构与它作为蛋白质合成模板的功能有密切关系，所以是基因表达的重要调控环节。 编码蛋白质的基因转录时首先生成前体pre-mRNA(或称核不均一RNA，hnRNA)，然后再加工剪接为成熟mRNA。 3 真核生物基因转录后加工的多样性 真核生物的基因可以按其转录方式分为两大类： 简单转录单位 复杂转录单位。 这两种转录方式虽然最终都产生蛋白质，但它们的转录后加工方式是不同的。 简单转录单位。 这类基因只编码产生一个多肽，其原始转录产物有时需要加工，有时则不需要加工。有3种不同形式： 第一种简单转录单位，如组蛋白基因，它们没有内含子，因此不存在转录后加工问题，其mRNA3’末端没有poly(A)，但有一个保守的回文序列作为转录终止信号。 第二种简单转录单位包括腺病毒蛋白IX、α-干扰素和许多酵母蛋白质基因，它们没有内含子，所编码的mRNA不需要剪接，但需要加poly(A)。 第三种简单转录单位包括α和β-珠蛋白基因及许多细胞蛋白基因，这些基因虽然都有内含子，需要进行转录后加工剪接，还要加poly(A)，但它们只产生一个有功能的mRNA，所以仍然是简单转录单位。 简单转录单位转录后加工有3种不同形式 复杂转录单位。 含有复杂转录单位的主要是一些编码组织和发育特异性蛋白质的基因，它们除了含有数量不等的内含子以外，其原始转录产物能通过多种不同方式加工成两个或两个以上的mRNA。也有三种情况： 利用多个5’端转录起始位点或剪接位点产生不同的蛋白质 利用多个加poly(A)位点和不同的剪接方式产生不同的蛋白质。这类基因调控点不在5‘末端和内含子的不同剪接，而在于有两个或多个加poly(A)位点，因此可通过不同的剪接方式得到不同的蛋白质。 虽无剪接，但有多个转录起始位点或加poly A位点的基因。 前mRNA不同的剪接方式造成了不同组织中不同的降钙素样蛋白 mRNA有效性的调控 真核生物能否长时间、及时地利用成熟的mRNA分子翻译出蛋白质以供生长、发育的需要，是与mRNA的稳定性以及屏蔽状态的解除密切相关的。 原核生物mRNA的半衰期很短，平均大约3min。高等真核生物迅速生长的细胞中mRNA的半衰期平均约为3h。在高度分化的终端细胞中许多mRNA极其稳定，有的寿命长达几天或十几天，加上强启动子的转录，使一些终端细胞特有的蛋白质合成达到惊人的水平。 例如，家蚕丝心蛋白基因具有很强的启动子，几天内即可转录出105个丝心蛋白mRNA，而它的寿命长达4天，每个mRNA分子能重复翻译出105个丝心蛋白，所以4天内可产生1010个丝心蛋白，说明mRNA寿命的延长是mRNA有效性的一个重要因素。 8.6.2 翻译水平的调控 1 真核生物mRNA的“扫描模式”与蛋白质合成的起始 AUG的前和后序列特征为A/G NNAUGG，这使得核糖体滑行到mRNA的第一个AUG能准确识别并起始翻译。 2 mRNA5'末端帽子结构的识别与蛋白质合成 因为绝大多数真核生物mRNA5‘末端都带有“帽子”结构，所以，核糖体起始蛋白质的合成，首先面临的问题是如何识别这顶“帽子”。 真核生物mRNA5’末端可有3种不同的帽子，即0型、1型和2型，其主要差异在于帽子中碱基甲基化程度的不同。 3 mRNA的稳定性与基因表达调控 在高等真核生物中转运铁蛋白受体（TfR）和铁蛋白负责铁吸收和铁解毒。这两个mRNA上存在相似的顺式作用元件，称为铁应答元件（IRE），IRE与IRE结合蛋白（IREBP）相互作用控制了这两个mRNA的翻译效率。 当细胞处于缺铁或高铁水平时，能产生两个数量级的蛋白水平差异，却没有在mRNA水平上发现存在显著差异。 研究表明，位于5’非翻译区的IRE控制了铁蛋白mRNA的翻译效率，去掉这个非翻译区IRE，可造成铁蛋白的永久性高水平翻译。当细胞缺铁时，IRP与IRE具有高亲和力，两者的结合有效地阻止了铁蛋白mRNA的翻译。与此同时，TfR mRNA上3’非翻译区中的IRE也与IRP特异结合，有效地阻止TfR mRNA的降解，促进TfR蛋白的合成。 4 可溶性蛋白因子的修饰与翻译起始调控 许多可溶性蛋白因子（起始因子），对蛋白质合成的起始有着重要的作用，对这些因子的修饰会影响翻译起始。 (1) eIF-2磷酸化对翻译起始的影响 (2) CBPII活性与翻译的起始 脊髓灰质炎病毒感染HeLa细胞 CBPII失活 有帽子的宿主mRNA不翻译，没帽子的病毒mRNA翻译 添加CBPII