双缩脲反应实验报告.docxVIP

双缩脲反应实验报告 　　目录　　实验一蛋白质及氨基酸的颜色反应............................................................................0实验二氨基酸的分离鉴定——纸层析法.....................................................................5实验三蛋白质的性质实验............................................................................................7实验四血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳............................................................................9实验五考马斯亮蓝法测定蛋白质含量..........................................12实验六血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳.................................................................14第二部分附录...........................................................................................................17附录Ⅰ实验室规则与应急处理.................................................................................17附录Ⅱ实验记录和实验报告的书写.........................................................................18附录Ⅲ实验室基本操作.............................................................................................19附录Ⅳ实验所需的药品、试剂的配制.....................................................................22附录Ⅵ实验所需的设备及其使用方法.....................................................................25　　实验一蛋白质及氨基酸的颜色反应　　一、目的和要求　　1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理。2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法。二、仪器与试剂仪器　　1、试管；2、试管架；3、恒温水槽；4、酒精灯；5、电吹风机；8、分析天平。试剂　　1、蛋白质溶液：将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍，多层纱布过滤，滤液4oC保存；2、氢氧化钠溶液：称取NaOH，蒸馏水溶解并定容至200mL；3、硫酸铜溶液；称取CuSO4，蒸馏水溶解并定容至200mL；4、甘氨酸溶液：色氨酸溶液：酪氨酸溶液：精氨酸：组氨酸溶液：　　苯丙氨酸酸溶液：蛋氨酸溶液：半胱氨酸溶液：　　分别称取各氨基酸，蒸馏水分别溶解并定容至200mL，4oC保存；　　5、茚三酮水溶液：称取茚三酮，蒸馏水溶解并定容至100mL；　　6、茚三酮-乙醇溶液：称取茚三酮，乙醇溶解并定容至100mL，即用即配；　　7、头发，指甲屑；　　8、浓硝酸：浓盐酸；浓硫酸；冰醋酸；　　9、苯酚溶液：称取苯酚，蒸馏水溶解并定容至200ml；　　10、α-萘酚乙醇溶液：称取α-萘酚，95%乙醇溶解并定容至100ml即用即配；　　11、NaBrO溶液：2克溴溶于100ml5%NaOH中，置棕色瓶中，可在暗处保存两周12、鸡蛋清：　　13、偶氮试剂：溶液A；溶液B；A、B溶液分别保存在密闭瓶中，用时以等体积混合。　　14、醋酸铅溶液：称取Pb(Ac)2，蒸馏水溶解并定容至100ml；15、醋酸铅试纸：将滤纸条浸入10%醋酸铅溶液中，湿透后取出，100oC烘干即可。三、实验内容　　对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、坂口反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等进行定性确定。　　双缩脲反应1、实验原理　　当尿素加热到180oC左右时，两个分子的尿素缩合成双缩脲并放出一个分子氨，双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成红色络合物，即双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有多个肽键，其结构与双缩脲相似，故能发生此反应，而形成紫红色或蓝紫色的配合物。　　OC　　+