慢性束缚应激大鼠模型的证治相关性研究-中医诊断学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 证治相关性研究是中医诊断学中有关证研究的薄弱环节，近年来也成为了中医诊断学研 究的一个热点。应激是机体的非特异保护适应机制，但它也引起机体自稳态的变动，甚至导 致疾病。导致机体应激反应的因素是多方面的，可以是躯体的、心理的，也可以是社会文化 的，应激的变化可涉及多个系统，引起体内组织学、生理学、生化学改变，尤其与神经内分 泌和免疫系统关系密切。有研究表明在社会流行病中约75％-90％-与应激有关，应激的作用已 越来越受到人们的重视。特别是近十多年来，有关应激的研究在整个人类健康的研究中占据 了一个十分显著的地位。 本课题目的在于：①建立慢性束缚应激大鼠的动物模型并进行评价；②从理论研究和动 物实验研究两个方面，系统地探讨了慢性束缚应激的病理生理基础：③对比研究逍遥散、四 君子汤和金匮肾气丸三种中药复方抗应激的作用机理；④探讨一睫陛束缚应激大鼠模型的中医 证治相关性。 本论文为国家自然科学基金资助项目(№与霍英东教育基金资助项目 (№：81037)的主要内容之一，分为理论研究和实验研究两部分。 理论研究：主要探讨了以下几方面的内容。①应激的概念和分期；②中医对应激原的认 识，以及中医肝、脾、肾三脏在应激中的作用及慢陛束缚应激的主要病机；③应激动物模型 的制作；④应激与神经内分泌免疫网络的关系；⑤应激与神经肽的关系；⑥应激和微量元素 锌和硒的关系。 实验研究： 实验一、慢性束缚应激大鼠模型的建立、评价及中药复方的影响。 本实验的目的在于①探讨慢性束缚应激状态下大鼠行为学的变化；②探讨三个复方对 慢性束缚应激大鼠行为变化的影响；③探讨慢性束缚应激时大鼠进食量和体重的变化；④对 比不同治疗方法对慢性束缚应激大鼠进食量和体重的影响；⑤对慢性束缚应激大鼠模型的进 行评价。 将二级雄性sD大鼠60只，随机分为正常对照组、7天模型组、21天模型组、 四君子汤组、逍遥散组、金匮肾气丸组6组，每组各10只。实验所用的中药复方分 别选用《太平惠民和剂局方》中的逍遥散(北柴胡309、当归309、白芍309、白术 309、茯苓309、炙甘草159、生姜log、薄荷lOg)、四君子汤(党参309、自术159、 茯苓1 59、炙甘草109)和《金匮要略》中的金匮肾气丸(干地黄609、山药309、 山茱萸1 Og、泽泻1 59、茯苓1 59、牡丹皮1 59、桂枝1 Og、炮附子109)。以上药物 按一定的工艺制成药粉备用。以慢性束缚方法制作应激大鼠模型，将大鼠束缚于特 制的束缚架上，每日3小时，连续21天(B组为7天)。自造模第一日始，各用药组 每日在束缚前1小时分别灌服逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸，其它各组则灌服等 体积的蒸馏水。每日称量大鼠体重、计算进食量，实验结束前做行为学测定(包括 旷场实验和鼠尾悬挂实验)。 实验二、慢性束缚应激大鼠模型免疫功能的变化及中药复方的影响 研究目的为：①研究慢性束缚应激时大鼠免疫器官的变化情况；⑦研究慢陛束缚应激时 2 2 慢性束缚应激大鼠模型的证治相关性研究 免疫细胞功能的变化；③研究慢性束缚应激时血清免疫相关细胞因子的改变；④对比三个复 方对慢性束缚应激时机体免疫器官、免疫细胞功能以及血清细胞因子的调节作用。 将大鼠分为正常对照组、7天模型组、21天模型组、逍遥散组、金匮肾气丸组、四君子 汤组6组。造模及给药方法同前。实验结束时，将大鼠断头处死，取血置于低温离心机 中，3500rpm，离心10分钟，取血清，呆用双抗夹心ABC-ELISA法检测其中IL_1 D、IL-2、IL_6 的含量，采用巨噬细胞NO：释放法检测其中IFN_y的含量；将胸腺和双1则肾上腺取出，在电 子天平上称重，计算胸腺指数和肾上腺指数；采用中性红比色法测定腹腔巨噬细胞的吞噬功 能；制备脾细胞悬液，检测淋巴细胞转化功能。 实验三、慢性束缚应激大鼠模型皮层和海马BDNF、TrkB、NT，的变化及中药复方 的影响 大鼠分组和造模方法同实验一。实验目的为：①研究慢陛束缚应激时大鼠皮层和海 马的BDNF、TrkB、NT，变化；②对比三个复方对皮层和海马BDNF、TrkB、NT。的影响的异 同。实验结束时，大鼠用10％的水合氯醛麻醉，4％多聚甲醛溶液通过心脏灌注固定后取脑， 置于4％多聚甲醛溶液中后固定。然后将脑组织移至20％的蔗糖溶液中，待组织下沉后，液 氮骤冷，于衡冷低温切片机中制备30 gtm的切片，用免疫组织化学结合图像分析的方法观察 皮层和海马BDNF、TrkB、NT 3