液泡的活体染色与观察实验报告.docx

液泡的活体染色与观察实验报告 　　海南师范大学生命科学学院实验报告　　生物科学系XX级一班姓名：学号：　　科目：细胞及遗传学实验实验项目：线粒体和液泡系的超活染色与观察　　一、实验目的：　　观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。　　学习一些细胞器的超活染色技术。　　二、实验原理：　　线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基。　　三、实验用品：　　1、材料：人口腔上皮细胞。　　2、试剂：1%，1/5000詹纳斯绿B溶液　　四、实验方法：　　1、取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。　　2、实验者用牙签宽头在自己口腔颊黏膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的黏液状物放入载玻片的染液滴中，染色10-15分钟，盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。　　五、实验结果：　　1、在显微镜下观察，可以看到口腔上皮细胞一个个分散的被染成淡蓝色的细胞在细胞中可以看到在核周围有被染成深蓝色的颗粒状结构，即是线粒体。　　六、实验结果分析：　　因为特定的活体染色剂特异地针对某种细胞器的生理生化特点起作用。例如詹纳斯绿B只对线粒体具有专一性；而中性红则只对液泡系具有专一性。因此，只用一种活性染色剂很难同时观察到多种细胞器。用詹纳斯绿B就可以观察到线粒体了。　　实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察　　一、实验目的：　　1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。　　2、了解细胞的超活染色技术。　　二、实验原理：　　活体染色是使生活有机体的细胞或组织进行特异性着色但对样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，既可以显示生活细胞内的某些特定结构又不会影响细胞的生活状态和造成细胞死亡。通常分为体内活体染色和体外活体染色。体外活体染色又称为超活染色。活体染料主要是靠染料的“电化学”特性。例如碱性燃料就是靠表面带有的阳离子与被染的细胞部分的阴离子相互吸引而着色。詹纳斯绿B和中性红即是最常用的两种。前者是线粒体的专一活性染色剂，线粒体中的氧化酶使染料氧化即有色状态，而在周围空间中染料仍保持还原即无色状态。中性红对液泡系的染色有专一性，而对核与胞质不着色。　　三、实验用品：　　1器材：显微镜，恒温水浴锅，刀片，镊子，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。　　2试剂：Ringer溶液；　　10%、1/3000中性红溶液：　　称取中性红溶于50mlRinger液，稍加热(30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存。临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29mlRinger溶液混匀，装入棕色瓶备用。　　1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：　　称取50mg詹纳斯绿B溶于5mlRinger溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液lml加入49mlRinger溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配。3实验材料：人口腔上皮细胞，黄豆根尖。　　四、实验方法：　　1人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察　　将清洁载玻片放在37度恒温水浴锅的金属板上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B溶液，随后用牙签在口腔颊或者上颚处刮取上皮细胞放在载玻片的染液滴中，并搅动几下。染色处理10-15min后盖上盖玻片进行观察。　　2植物细胞液泡系的超活染色与观察:　　取豆芽的根尖左右的长度进行纵切，尽量切的很薄，滴加中性红染液，室温染色5-10min，吸去染液加一滴Ringer溶液，盖上盖玻片进行观察。注意此时应该轻压盖片使根尖尽量压扁利于观察。　　五、实验结果与作业：对人口腔上细胞的线粒体活性染色结果绘图，此时应该可见在细胞中有一个较大较明显的细胞核，在细胞核周围有一些蓝绿色颗粒状的线粒体分布。　　对黄豆根尖液泡系的染色进行观察，此时可分别对根尖的不同区域进行观察，并对其中的细胞的液泡　　进行比较。在根尖生长点附近的细胞形状较小排列紧密，其中的液泡被染成红色，数量不只一个且较小；在伸长区的细胞形状逐渐变为长方形，形状较大排列较为规则，其中的液泡也逐渐变少变大，并且颜色也变浅。至成熟区后细胞中只可见一个很大的液泡。　　实验三线粒体和液泡系的超活染色与观察　　一、实验目的：　　观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。　　学习一些细胞器的超活染色技术。　　二、实验原理：　　活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又