棉铃虫蜕皮调节转录因子-激素接受子3基因的特征及功能-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文巾以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：塑查垒 日 期：l堕．兰主! 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：塑墨窒 导师签名：．盥!坠 日期：洫￡蔓?。 山东大学硕士学位论文棉铃虫蜕皮调节转录因子一激素接受子3基因 山东大学硕士学位论文 棉铃虫蜕皮调节转录因子一激素接受子3基因 的特征及功能 THE CHARACTERS AND FUNCTIONS OF月EL，CD咖厨 A尺』l椰GE总4 MOU二REGUL棚NG TRANSCRIPn0N FACTOR．HORMONE RECEPTOR 3 摘要 棉铃虫(Helicoverpa a,migera)是一种危害性极大的昆虫，每年都给我国及全世界 造成巨大的经济损失，因而它的防治工作也越来越引起人们的重视。然而，传统的杀虫 方式由于效果差、污染环境严重等问题而不再适合形势的需要。生物农药杀虫就是适应 这一需要而产生的。其中，通过抑制其蜕皮来达到杀虫目的是一条较好的途径．这就需 要对棉铃虫的蜕皮机理有非常详细的了解，而整个蜕皮过程是一套复杂的涉及众多基因 参与的级联反应过程。要全面认识这个过程，首先要选好候选基因．然后进一步研究与 之相关的基因和其他蛋白因子，以此类推，逐步掌握蜕皮过程机理。本实验选择的候选 基因是棉铃虫蜕皮调节转录因子一激素接受子3基因。 激素接受子3(Hormone Receptor 3)是一种蜕皮调节转录因子(Molt—Regulating Transcription Factor)，属于孤儿核受体基因超家族，调控蜕皮过程中相关基因的表达， 是蜕皮相关基因早期基因簇的典型表达产物，可与DNA上特定的序列结合。参与蜕皮 激素诱导的晚期基因的转录活性产物的调控，是蜕皮级联反应中的关键因子。棉铃虫蜕 皮激素接受子3(HHR3)是HR3家族成员之一，它调控棉铃虫的蜕皮过程。棉铃虫HHR3 基因全长1668bp，即HHR3蛋白为556个aa，分子量为61．16kDa。在大肠杆菌中表达 得到的是GST-HHR3融合蛋白，分子量为94kDa左右。 本人选取棉铃虫为实验材料，以已知的棉铃虫蜕皮调节转录因子一激素接受子3基 因(HHR3)为候选基因，利用本实验室提供的在大肠杆菌融合表达的GST-HHR3进行 了下游研究，然后提取棉铃虫基因组DNA，Rsa I酶切消化后加上接头，PCR扩增，以 提高DNA片段的丰度，让PCR产物与HHR3蛋白结合，再通过兔抗HHR3抗体免疫沉 山东大学硕士学位论文 山东大学硕士学位论文 淀，得到结合有DNA片段的蛋白沉淀，经三次洗涤后，酚氯仿抽提DNA，以此为模板 进行PCR扩增。为了证明所得到的目的DNA片段不是抗体结合的，设计了对照实验， 即用PBS代替HHR3蛋白，结果没有得到扩增产物，说明获得的DNA片段是HHR3蛋 白所结合的。 为了阐明HHR3基因内含子分布及大小情况，根据已知的HHR3基因序列，设计了 多对特异性引物，再以棉铃虫基因组DNA为模板进行PCR扩增。通过比较扩增结果和 已知HHR3基因序列，得到了一个内含子序列，并证明了另外部分位置没有内含子。还 有一段序列的内含子不清楚，需要设计新的特异性引物进行研究。 另外，本文还应用177 Select Phage Display system淘选了与HHR3结合的辅助蛋白 因子．棉铃虫表皮T7噬菌体库是本实验室已经构建好的，然后以GST-HHR3融合蛋白 为配体，通过亲和淘选，得到了一个结合蛋白及其部分基因序列。 关键词 棉铃虫(Helicoverpa armigera) 蜕皮调节转录因子 内含子 T7 Select Phage Display system 2 山东大学硕士学位论文THE 山东大学硕士学位论文 THE CHARACTERS AND FUNCTIONS OF日EL6CD愀瞰 A足嬲E见4 MOL，r_REGULATING TRANSCRIPTION FACTOR．HoRMoNE RECEPTOR 3 Abstract Helic