黄芪对小鼠急性弓形虫感染的治疗作用及机制研究-病理学专业毕业论文.docxVIP

南京医科大学硕士学位论文黄芪对小鼠急性弓形虫感染的治疗作用及机制研究 南京医科大学硕士学位论文 黄芪对小鼠急性弓形虫感染的治疗作用及机制研究 中文摘要 系统性炎症反应综合征(Systemic Inflammatory Response Syndrome，SIRS)和多器官功能障碍综合征(Multiple Organ Dysfunction Syndrome，MODS)是严重创伤和感染疾病过程中的疑难问题，死亡率 高迭40％一70％。SARS CoV引起的非典型性肺炎中的重症病例均属 于SIRS—MODS范畴。SIRS的病理基础是免疫应答失去平衡。由于 免疫网络的调节系统失控，机体免疫亢进和免疫抑制交替出现或并存， 至今仍缺乏有效的治疗手段。而一些具有双向免疫调节作用的中药在 临床上显示出良好的效果，如大黄类中药治疗肠道缺血再灌注引发的 SIRS—MODS。黄芪是具有免疫调理作用的补益类中药，性味平和， 有多种成熟剂型被广泛应用于临床，可用于多种疾病的辅助治疗。在 一些SIRS动物模型中也观察到黄芪对某种细胞因子有诱导或抑制的 作用。为了验证黄芪对SIRS的整体治疗效果，本研究选用了急性弓形 虫感染小鼠作为SIRS模型，观察了黄芪对不同剂量弓形虫速殖子感染 小鼠生存情况的影响，并动态观察了黄芪对急性弓形虫小鼠肝、肺虫 荷，肝、脑、脾、肺的组织学，血清舭J水平，肝iNOS，血清IFN- v、IL．18水平，及脾细胞凋亡的影响，探讨黄芪的作用机制及其作为 SIRS辅助治疗药物的可行性。 研究方法 1．用105(高剂量)，103(中剂量)，102(低剂量)速殖子腹腔感 染小鼠，每个感染剂量组小鼠中设立2个实验组分别给于黄芪 o．0759／d／mice，阿齐霉素150mg／d／kg灌胃治疗，1个对照组给于蒸馏 水，连续lOd。观察10d内每天的小鼠存活率绘制累计生存曲线，并 计算平均存活时间。 2．建立102速殖子感染小鼠模型，设黄芪治疗组和对照组。2组 辩褒医科大学醺士学位论文小鼠定期分批处死，取血清和肝、肺、脾、脑。用荧光定量PCR检测 辩褒医科大学醺士学位论文 小鼠定期分批处死，取血清和肝、肺、脾、脑。用荧光定量PCR检测 感染露第4、8天(4、8dpi，day post-infection)辑、麓峻虫荷。强赖 氏法测定4、5、6、7dpi血清ALT水平。取2～8dpi天的肝、牌、肺、 脑，中性福尔马钵固定后作HE染色切片。取2、4、6、8dpi肝脏做冷 冻切辩，NADPH—D法进行诱导栏一氧化氮合酶(iNOS)酶组化染色。 用ELISA方法测定2、4、6、8dpi血清IFN．v水平及4、6、8dpi的血 清l毛．18水乎。ANNEXIN V-FITC方法经漉式鳃胞仪捡溅5、7◇i霹 细胞凋亡率。 研究结果 1．高、中、低裁量速簌予感染靖，黄莛组的累诗生存曲线均在对 照组右侧。高、中速殖子感染时，黄芪组小鼠平均存活时间为5．57d 争6．23d，与对照鳃相比差务没有显著燃(PO．05)，阿齐霉黉组小鼠 平均存活盼问为6．96d争8．12d，显著筠于对照组(P0．05)。102个速 殖子感染时，黄芪组小鼠平均存活时间为8．74d，显著高于对照组 (P0．05)，露赛霉素组小鼠乎均存活时耀为7。7蜷，与对照雯簌穰怼差 异没有显著性(P0．05)。 2．4dpi和8dpi肝、肺虫荷两组没有显著差异，感染后黄芪纽和 对照缓血清A醚拳乎耱续上舞，黄芪圣嚣4dpi为87。20u(卡门氏单位)， 显著高于对照组(34．44u)(P0．05)，黄芪组8dpi为172．5u，显著低 于对照组(225．69u)(P0．05)。感染后前6d黄芪缓和对照组血清IFN— y水平待续主秀，黄芪组4dpi秀21。Opg／ml，显著高于对照组(5。62 pg／m1)(P0．05)。黄芪组8dpi为15．36 pg／ml，显藩高于对照组(9．73 pg／m1)(P0。05)。黄芪组争对照组血清l己一18水乎持续上升，黄芪组 8dpi为594．75 pg／ml，显著低于对照组(709。00 pg／m1)(PO．05)。4dpi 起，赞芪组肝脏iNOS染色明显比对照组增强，小叶中央和jc管区均 染。对照经iNOS表达局限予小咔中央，汇管区浅染。黄芪组5、7dpi 的脾细胞凋亡率分别为22．5％、28．0％；36．9％、40．8％，均鼠藩低于 南京莲科丈学礤士学位论文对照勉(41．o％、45．4％；53．o％、49。4％)(Po。05)。 南京莲科丈学礤士学位论文 对照勉(41．o％、45．4％；53．o％、49。4％)(Po。05)。 结论 1．黄芪对高、中、低荆蚤速殖子感染的小鼠均有一定的辅助治疗 肆霸，对蕊裁量感染小鼠的湾疗锋震臻显。 2．黄芪通过对免疫应答的