抗肿瘤血管新生基因治疗脑胶质瘤的临床基础研究-神经外科学专业毕业论文.docxVIP

抗肿瘤血管新生基因治疗胶质瘤的临床基础研究2000级博士蔺玉昌 抗肿瘤血管新生基因治疗胶质瘤的临床基础研究 2000级博士蔺玉昌 导师徐启武 摘要目的研究人脑胶质瘤Endostatin(Es)基因的定位、分 布及肿瘤恶性程度的相关性；探讨以重组I型单纯疱疹病毒(HSV一1) 为载体，Endos切rtin基因(HSv．1．EscDNA)对sD大鼠胶质瘤的治 疗效果及肿瘤微血管密度的变化。方法①免疫细胞化学分析，检测 30例不同级别(wHO II～Ⅳ级)人脑胶质瘤标本中Endostatin的定 位及分布；②使用图文分析系统，对不同级别脑胶质瘤细胞的不同染 色强度进行灰度值测定；③对质粒包埋的Endos协tin基因 (psecTagA．EscDNA)进行测序鉴定；④采用脂质体法将Endostatin 基因(psecrragA．EscDNA)转染人脐静脉内皮细胞(EVC．304)，并 以I汀-PCR、westcm B10t分别从鼢n水平和蛋白水平鉴定转染是否 成功；⑤以FcM测细胞周期，MTT实验测细胞活力，验证Endostatin 基因对血管内皮细胞增殖的抑制作用。⑥以c6胶质瘤细胞植于SD 大鼠腋部皮下制作胶质瘤动物模型；⑦以重组I型单纯疱疹病毒 (Hs卜1)为载体，构建HS卜卜EscDNA，使用特制的微量注射器，进 行瘤内注射，注射所用的总的病毒滴度为：1×105 PFU(克隆形成单 位)。⑧分别观察记录肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线；并观察毒性反 应。⑨对肿瘤标本进行微血管标记、计数，并比较治疗前后肿瘤微血 管数量的变化。结果①在原发性人脑胶质瘤标本中，肿瘤细胞、内 皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞中均可发现Endos切tin阳性免疫反应； 皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞中均可发现Endos切tin阳性免疫反应； 高度恶性人脑胶质瘤(wHOⅣ级)中Endos锄n抗体阳性标记细胞 比例明显低于低度恶性胶质瘤(wHOⅡ级)(网．009)；②免疫染色 后胶质瘤细胞平均灰度值测定：wHO II级胶质瘤为26．83、wHOⅢ 级为69．63、WHOⅣ级为86．19，三组之间有显著差异(p0．01)。 ⑨测序结果，基因序列与Geng BaJll(中psecTagA-ES序列和 pse州序列进行比对，完全相同。④Endostatin转染EVc一304细 胞，PCR、west锄分别检测到EscDNA；廷独ndostatin转染EVC．304 细胞后，FCM显示内皮细胞出现凋亡，MTT显示细胞活力下降；⑥sD 大鼠胶质瘤经Endostatin基因(Hsv．1．EscDNA)治疗后，肿瘤生长 明显受抑、体积明显缩小、退缩至休眠状态，甚至完全消失(1例)。 ⑦HsV．1．EScDNA治疗后残存肿瘤微血管密度明显低于对照组(矽 O．01)。未见明显毒性反应。结论Endostatin存在于人脑胶质瘤多种 类型细胞中，高度恶性胶质瘤中Endostatin的阳性表达水平明显低于 低度恶性胶质瘤；Hsv．1．EScDNA能够有效地抑制SD大鼠胶质瘤增 殖、使肿瘤萎缩至休眠状态、甚至完全消失；Endostatin基因通过抑 制肿瘤血管新生对胶质瘤达到治疗作用，为l临床治疗脑胶质瘤这一世 界性难题提供确实可行的科学依据。 关键词： 重组Endostat证基因胶质瘤灰度血管新生基因治疗 内皮细胞HSV．1．EScDNA 英文摘要CIinic 英文摘要 CIinic ExperimentaI Research on Endostatin Gene Therapy fbr Glial Brain TumOr Doctor：Lt以Hch骶g s印e州sor：Pr啦ssor‰Qh燃 Depnr咖em 西Neurosurgery． 蛳tinted}kⅡsh口n Hospit口l 彭FuD册Universi妙 Abstract Objecave： To study 10calization of endostatin(ES) in humall 91iomas aIld relationship b咖ecn endostatin and diffe豫1t WHO gmde 91iomas；explore me iIlllibito巧role ofendostatin gene(HSv-1-EScDNA) on me endotllelial cell proliferation a11d me growth of rat C6 91iomas a11d alteration of microVessel densities(MVD)in remaining tIlmors after therapy． Methods： ① Endostatin was immunost