布鲁氏菌eryA基因的克隆、原核表达及生物信息学分析.PDFVIP

2019年第36卷第5期 布鲁氏菌eryA 基因的克隆 原核表达 、 及生物信息学分析 宋前进，杭天宇，乌东高娃，李伊铭，关平原，温永俊 （内蒙古农业大学兽医学院，农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室， 内蒙古呼和浩特　010018 ） 摘　要：为分析羊种布鲁氏菌Rev.I 株的基因结构、功能及作为诊断抗原的可能性，从Rev.I 株基因组中扩增 eryA 基因片段，构建重组质粒pET-30a-eryA 并进行原核表达、Western-blot 检测，同时对该基因进行生物信息 学分析。结果显示：本试验成功克隆并表达了eryA 基因；经Western-blot 检测发现，该基因编码蛋白可与阳性 血清发生特异性反应，具有良好的免疫原性；生物信息学分析显示，该蛋白没有跨膜区结构，无信号肽，二级 α- eryA 结构中 螺旋比重最大；抗原表位分析显示：该蛋白含有较多的抗原决定簇。因此，推测 蛋白有望作为 布鲁氏菌的免疫诊断抗原，这为进一步探索布鲁氏菌基因工程疫苗的研制及iELISA 诊断试剂盒的建立奠定了 基础。 关键词：布鲁氏菌；eryA 基因；原核表达；免疫原性 S . B - X - - 中图分类号： 852 61　　文献标识码： 　　文章编号：1005 944 （2019 ）05 0061 08 DOI . /j.issn. - X. . . ：10 3969 1005 944 2019 05 012 Cloning，Prokaryotic Expression and Bioinformatics Analysis on eryA Gene of Brucella melitensis Song Qianjin，Hang Tianyu ，Wudong Gaowa ，Li Yiming ，Guan Pingyuan，Wen yongjun College of Veterinary Medicine Inner Mongolia Agricultural University Key Laboratory of Clinical Diagnosis and （ ， ， Treatment of Animal Diseases，Ministry of Agriculture and Rural Affairs ，Hohhot ， Inner Mongolia　010018，China ） Abstract ：In order to analyze the genetic structure and function of Rev. I strain of Brucella melitensis and its possibility to be used as diagnostic antigen ，the eryA gene fragment was amplified from Rev.I strain to construct the recombinant plasmid pET-30a-eryA with prokaryotic expression and Western-blot detec