酶解小麦蛋白制取谷氨酰胺活性肽的研究-食品科学与工程专业毕业论文.docxVIP

浙江大学硕上学位论文 浙江大学硕上学位论文 摘要 摘要 本论文研究以小麦蛋白为原料，经过蛋白酶水解，制取富含谷氨酰胺的生物 活性肽。并在此过程中，研究了肽中谷氨酰胺含量的测定方法以及肽分析的常用 方法，包括肽氨基酸组成的分析和肽分子量分布的分析。 本文首先建立了肽中谷氨酰胺的定量分析方法。通过试验，采用双三氟乙酸 基碘苯(BTI)与肽50℃反应2h，将肽中的谷氨酰胺保护起来，使其在随后的酸 水解(150。C 1．5h)过程中不会转化成谷氨酸，经异硫氰酸苯酯(PITC)衍生后， 通过反相高效液相色谱(c。8柱紫外检测器)，用外标法定量分析。 其次，本文研究了肽中氨基酸组成的定量分析方法和肽分子量分布的分析。 肽氨基酸组成的定量分析方法，采用异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂，反相高效液 相色谱梯度洗脱，紫外检测器，可同时分离测定十八种氨基酸的含量。肽分子量 分布的分析方法，采用凝胶过滤色谱法，色谱柱为TSK—GEL G2500PWXL f7．8*300mm)，以三氟乙酸乙腈水溶液为洗脱剂，分子量的对数与保留时间呈线 性关系。 然后，进行了谷氨酰胺活性肽制取工艺的优化，工艺优化的重点为酶解反应 条件的优化。通过对酶种类、底物浓度、酶浓度、酶解体系的pH、酶解温度和 酶解时间等因素进行试验，得出酶解反应的最佳条件为：酸性蛋白酶、[s】=15％、 E／S=5％(酶的活力为5万单位／克)、pH=2．5、温度45。C、酶解3h。 最后，在1 1升的恒温反应器中进行产品的扩试，效果比较理想，得到的产 品中蛋白含量为73．3％，水分含量为4 6％，谷氨酰胺含量为11．2％，产品得率 为43．2％。 关键词谷氨酰胺生物括性肽小麦蛋白酶解高效液相色谱条件必需氨基酸 浙江人学硕=}j学位论文Abstract 浙江人学硕=}j学位论文 Abstract The thesis studied Oil the manufacturing technologies of bioactive peptides， which contained abundant Gln，made from wheat proteins by proteatic hydrolysis． The methods to analyze the content of Gin，the composition of anaino—acids，and the distribution of molecular weight of peptide were developed as well． Firstly，the quantitative analysis method of Gin of peptide was established．Gin in peptides was protected by reacting with fbis(trifluoroacetoxy)iodo]benzene(BTI)for 2 hours at 50。C to prevent the Gln to be transformated into glutamic acid in the succedent acid hydrolyzation．Then after being derived by phenylisothiocyanate(PITC)， Gin was quantificated by RP—HPLC(C1 8 column，UV-detector)using the external standard method． Secondly,the analysis of the composition of amino—acids and the distribution of molecular weight ofpeptides were studied．18 kinds ofamino acid could be separated simultaneously and quantificated by UV-detector after eluted gradiently by RP-HPLC， using PITC as precolumn derivation reagent．Gel filtration chromatography was used in the analysis of the distribution of molecular weight in of peptides，chromatograghic column was TSK—GEL G2500PWXL(7．84300mm)，a mixture of trifluoroacetic acid．aceto