慢病毒介导LXRs过表达对高糖诱导H9C2细胞凋亡的影响及机制-内科学(心血管内科)专业毕业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 观察高糖对 H9C2 细胞 Bax、Bcl-2、NF-κB、caspase 3 的表达及细胞凋亡 的影响；探讨过表达 LXRs 对高糖诱导的 H9C2 细胞凋亡的干预作用及机制。 方法： 体外分别以低糖（5.5mmol/L 葡萄糖，作为正常对照）、甘露醇（5.5mmol/L 葡萄糖+27.5mmol/L 甘露醇）及高糖（33 mmol/L 葡萄糖）培养 H9C2 细胞（大 鼠胚胎心肌细胞）；获得携带 Nr1h2、Nr1h3 基因及空载体的重组慢病毒感染高 糖培养的 H9C2 细胞；采用 CCK8 检测各组 H9C2 细胞增殖抑制率；应用 qRT-PCR 分别检测 Bax mRNA、Bcl-2 mRNA 水平；Western blot 分别检测 NF-κB 磷酸化 蛋白、Bax、Bcl-2、cleaved caspase3 蛋白表达；Hoechst 33342 染色检测细胞凋 亡率。 结果： 1.来源于大鼠胚胎心脏组织的 H9C2 细胞株在 10%FBS 低糖培养基正常贴壁 及生长。 2.CCK-8 结果显示：与对照组相比，甘露醇组差异无统计学意义（P0.05）， 高糖组与 GFP 组抑制率最高，差异有统计学意义（P0.01）；与高糖组相比，GFP 组差异无统计学意义（P0.05），LXRα 和 LXRβ 组抑制率降低，差异有统计学 意义（P0.05）。 qRT-PCR 检测 Bax mRNA、Bcl-2 mRNA 表达结果：与对照组相比，甘露 醇组 Bax mRNA 差异无统计学意义（P0.05），高糖组与 GFP 组 Bax mRNA 明 显升高，差异有统计学意义（P0.01）；与高糖组相比，GFP 组差异无统计学意 义（P0.05），LXRα 和 LXRβ 组 Bax mRNA 明显降低，差异有统计学意义 （P0.05）。与对照组相比，甘露醇组 Bcl-2 mRNA 差异无统计学意义（P0.05）， 高糖组与 GFP 组 Bcl-2 mRNA 表达降低，差异有统计学意义（P0.01）；与高糖 组相比，GFP 组差异无统计学意义（P0.05），LXRα 和 LXRβ 组 Bcl-2 mRNA 上调，差异有统计学意义（P0.05）。 Western blot 检测 NF-κB 磷酸化蛋白、Bax 蛋白、Bcl-2 蛋白、cleaved caspase3 蛋白表达：与对照组相比，甘露醇组差异无统计学意义（P0.05），高糖组与 GFP II 组 NF-κB 磷酸化蛋白、Bax 蛋白、cleaved caspase3 蛋白表达均明显增高，差异 有统计学意义（P0.01）；与高糖组相比，GFP 组差异无统计学意义（P0.05）， LXRα 和 LXRβ 组 NF-κB 磷酸化蛋白、Bax 蛋白、cleaved caspase3 蛋白表达降 低，差异有统计学意义（P0.05）。与对照组相比，甘露醇组 Bcl-2 蛋白表达差 异无统计学意义（P0.05），高糖组与 GFP 组 Bcl-2 蛋白表达降低，差异有统计 学意义（P0.01）；与高糖组相比，GFP 组差异无统计学意义（P0.05），LXRα 和 LXRβ 组 Bcl-2 蛋白表达上调，差异有统计学意义（P0.05）。 5.Hoechst 33342 染色检测细胞凋亡：与对照组相比，甘露醇组细胞凋亡率 差异无统计学意义（P0.05），高糖组与 GFP 组细胞凋亡率明显增高，差异有统 计学意义（P0.01）；与高糖组相比，GFP 组细胞凋亡率差异无统计学意义 （P0.05），LXRα 和 LXRβ 组细胞凋亡率降低，差异有统计学意义（P0.05）。 结论： （1）高糖通过 NF-κB 的激活诱导 H9C2 细胞凋亡。 （2）LXRs 过表达能够改善高糖诱导的 H9C2 细胞凋亡。 （3）LXRs 过表达改善高糖诱导的 H9C2 细胞凋亡机制可能与抑制高糖诱 导的 NF-κB 信号通路激活有关。 关键词：糖尿病心肌病；慢病毒；肝 X 受体；核因子-κB；细胞凋亡 III Abstract Abstract ABSTRACT Objective: To observe the affect of high glucose to H9C2 cells on the expression of Bax, Bcl-2, NF-κB, caspase 3 and cell apoptosis;To investigate the intervention of lentiviral overexpression LXRs on high glucose-induced apoptosis in H9C2 cells and mecha