黄芪甲苷对缺糖缺氧复糖复氧大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的保护机制研究-微生物与生化药学专业毕业论文.docxVIP

Protection mechanisms of endothelial cells and glial cells Astragaloside to OGD complex sugar reoxygenation brain microvessels A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Zhao Qinghui Supervisor: Prof. Pang Xiaobin May, 2015 I I PAGE PAGE IV 摘 要 目的：探讨黄芪甲苷对缺糖缺氧复糖复氧 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的 保护作用及其作用机制。 方法：对 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的原代培养及分离，用连二亚硫酸 钠建立 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧模型，黄芪甲苷对大鼠 脑微血管内皮细胞的毒性实验，黄芪甲苷对内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧损伤复供模型 形态学影响，MTT 法与 LDH 漏出率法检测不同浓度黄芪甲苷预处理的 SD 大鼠脑微血 管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后的成活率，用 SOD、MDA 检测试剂盒检测 不同浓度黄芪甲苷预处理的 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧 后 SOD、MDA 的变化，AO/EB 法检测黄芪甲苷对缺糖缺氧/复糖复氧胶质细胞凋亡的 影响，用 RT-PCR 法检测不同浓度黄芪甲苷预处理的 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质 细胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞 HIF-1α、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 mRNA 表达的变化， 用蛋白免疫印记法检测不同浓度黄芪甲苷预处理的 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细 胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞 Bcl-2、Bax 蛋白表达的变化。 结果：成功培养并分离了 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞，成功筛选了各细 胞缺糖缺氧/复糖复氧模型的条件。黄芪甲苷预处理后缺糖缺氧/复糖复氧的 SD 大鼠脑 微血管内皮细胞及胶质细胞成活率均提高。黄芪甲苷预处理后缺糖缺氧/复糖复氧的 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞 SOD 活力均增高，黄芪甲苷预处理后缺糖缺氧/复糖 复氧的 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞 MDA 含量均下降，AO/EB 法检测结果显 示黄芪甲苷可以抑制胶质细胞凋亡。不同浓度黄芪甲苷预处理的 SD 大鼠脑微血管内皮 细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞 HIF-1α mRNA 表达均增高，Bcl-2 mRNA 表 达均增高, Bax mRNA 表达均下降，Caspase-3 mRNA 表达均下降，不同浓度黄芪甲苷预 处理的 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧后细胞 Bcl-2 蛋白表达 均增多，Bax 蛋白表达均降低。 结论：黄芪甲苷对缺糖缺氧复糖复氧 SD 大鼠脑微血管内皮细胞及胶质细胞的具有 保护作用，其作用机制可能与抑制细胞凋亡的 HIF-1α,Bcl-2 基因表达增多和促进细胞凋 亡的 Bax,Caspase-3 基因表达下降有关。 关键词:黄芪甲苷，神经保护，IR，HIF-1α，Bcl-2，Bax，Caspase-3 III III PAGE PAGE IV ABATRACT Objective: To investigate the effect of astragaloside Ⅳ on astrocytes of rats and RBMEC s after IR injury. Methods: Prepare the primary cultures of astrocytes、RBMECs and neuron cells. Na2S2O4 induced astrocytes and RBMECs injury to establish in vitro IR model. we use MTT assay to deter mine the effect of different concentration of AST to RBMECs We observed the effects of astragal oside Ⅳ on RBMECs and astrocytes morphology after IR injury.The LDH assay kit