米曲霉内切型纤维素酶的纯化及性质研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

摘 摘 要 I I 摘 要 纤维素酶 ( Cellulase) 是分解纤维素的一类酶 , 包括内切葡聚糖酶 (endo-1,4- β -D-glucanase ，EC3.2.1.4)、外切葡聚糖酶(exo-1,4-β-D-glucanase ，EC3.2.1.91)和β- 葡萄糖苷酶(β-1,4-glucosidase， EC3.2.1.21)，这些酶组分协同作用将纤维素分解为葡 萄糖。内切型纤维素酶是内切型β-1，4-葡聚糖苷酶的简称(也称 Cx 酶或 CMC 酶)，属 于纤维素酶系，能将大分子纤维素降解为纤维寡糖，在纤维素酶系水解纤维素的过程中 起关键作用。米曲霉沪酿 3.042 是常用的酿造菌株，其分泌的纤维素酶分解物料中的纤 维素成分，有助于蛋白酶发挥作用。 本文采用刚果红染色法从米曲霉沪酿 3.042 成曲中鉴定出 4 种内切型纤维素酶组分， 分别称为 Cx 酶Ⅰ、Cx 酶Ⅱ、Cx 酶Ⅲ 和 Cx 酶Ⅳ。粗酶液经 DEAE-Cellulose-52 离子 交换柱层析得到 4 个活性峰，将 4 个活性峰用蒸馏水透析、浓缩后，以制备电泳法纯化 得到 Cx 酶Ⅰ、Cx 酶Ⅱ、Cx 酶Ⅲ 和 Cx 酶Ⅳ。 经 SDS分析， 分离纯化到的 Cx 酶Ⅰ、Cx 酶Ⅱ、Cx 酶Ⅲ为电泳纯的单一条带，分子量分别约为 31.8 kDa，34 kDa 和 26 kDa ；Cx 酶Ⅳ含有 4 个亚基，亚基的分子量分别约为 14 kDa，23.6 kDa，26 kDa， 33.5 kDa。 对米曲霉沪酿 3.042 成曲内切型纤维素酶酶学性质分析研究表明：粗酶的最适反应 温度为 50℃，酶在 30℃～60℃稳定性较好;酶促反应最适 pH 为 4.0，在 pH 3.0～10.0 之间稳定性较好； Zn2+、Fe2+、Cu2+离子对酶起激活作用， Mn2+、K+、Mg2+、Ca2+、 Na+ 对酶有抑制作用。 本研究从米曲霉沪酿 3.042 成曲中分离纯化到 4 个内切型纤维素酶组分，并对其酶 学性质做了研究，该工作是真菌纤维素酶体系基础研究工作的一部分，对真菌来源的纤 维素酶系组分的深入研究和对组分间相互协同作用关系的认识具有一定的理论意义。 关键词 米曲霉 内切型纤维素酶 离子交换层析 电泳 Abstract Abstract II II Abstract Cellulase is one kind of the enzymes that break down cellulose, including endo-glucanase(endo-1,4-β-D-glucanase, EC 3.2.1.4), exo-glucanase (exo-1,4-β-D-glucanase, EC3.2.1.91)and β-glucosidase(β-1,4-glucosidase, EC3.2.1.21).Cellulose is hydrolyzed into glucose with synergistic effect of these components. Endo-cellulase is also called as endo-beta 1,4-glucanase (also known as the Cx enzyme or enzyme CMC),which belongs to cellulase system.It can degrade macromolecular cellulose into cellobiose and play a key role in degradation of cellulose. Aspergillus oryzae 3.042 is commonly used in brewing, its cellulase decomposes cellulose of materials,assisting the proteases to hydrolyze the protein of materials. In this article, Four Cx enzymes were identified by Congo red staining, called as Cx enzymeⅠ,Cx enzyme Ⅱ,Cx enzyme Ⅲ and Cx enzyme Ⅳ respectively.DEAE-Cellulose-52 ion exchange chromatography was used to primarily separate endocellulases in the crude enzyme solution,it was found that the