量子点应用于肿瘤表面糖蛋白与免疫系统作用的研究-微生物学专业毕业论文.docxVIP

摘要摘 摘要 摘 要 肿瘤细胞膜糖蛋白作为影响肿瘤细胞信号传递、免疫原性的关键分子，与 肿瘤细胞的发生、发展有着极为密切的联系。肿瘤细胞膜糖蛋白的过量表达、 缺失或结构改变，直接影响肿瘤细胞的恶性转移、免疫逃逸。 本论文通过两种方法分离小鼠肺腺癌细胞LA795细胞膜表面的糖蛋白，并 制各糖蛋白．量子点荧光纳米颗粒，以实现在活体中对糖蛋白与免疫系统的相互 作用进行荧光示踪。第一种方法分离天然的肿瘤细胞膜糖蛋白。具体为利用亲 和素对糖基的亲合作用，以亲和层析的方法提取含有葡萄糖及甘露糖的糖蛋白。 第二种方法分离得到经过代谢标记的糖蛋白。首先合成含叠氮甘露糖，对肿瘤 细胞进行代谢标记，然后通过点击化学反应分离出肿瘤细胞膜表面的糖蛋白。 同时，自行合成了量子点荧光纳米颗粒。量子点是荧光性能极好的纳米颗 粒，可以实现对活体较深部位的成像，并且稳定、不易淬灭。利用巯基乙酸作 稳定剂合成水溶性CdSe／ZnS核壳型量子点荧光纳米晶体，粒子尺寸均匀、荧光 稳定。随后，通过酰胺反应制备糖蛋白．量子点荧光探针进行活体成像实验。结 果表明，糖蛋白．量子点荧光纳米颗粒在小鼠淋巴结处聚集，在活体水平证实了 肿瘤细胞膜糖蛋白的抗原特性。其后，进行的细胞因子表达芯片实验也表明注 射络合物的小鼠体IL一6，IL．12，IFN y等细胞因子的表达成升高趋势，而这些正 是与肿瘤免疫相关的细胞因子。这个结果验证了此糖蛋白．量子点荧光探针系统 用于研究肿瘤细胞糖蛋白与免疫系统相互作用的有效性。 此外，在本论文中将量子点用于肿瘤细胞靶向成像中。合成CdSe／ZnS量子 点，并与透明质酸偶联，得到透明质酸．量子点络合物。借助CD44受体一透明质 酸的相互识别，实现肿瘤细胞的靶向性成像。 综上所述，本研究成功利用量子点一糖蛋白荧光探针系统，实现对大分子与 免疫系统相互作用的活体水平的观察，并通过细胞因子芯片实验对结果进行了 印证。肿瘤细胞膜糖蛋白具有抗原特性，为进一步研究糖蛋白介导的肿瘤细胞 的恶性转移、免疫逃逸奠定了一定基础，并为开发新型抗肿瘤药物、肿瘤疫苗 提供新的思路。 关键词：肿瘤表面糖蛋白；量子点；活体成像；细胞因子芯片实验 AbstractAs Abstract As kev molecules that impact tumor cells signaling and immunogenicity，tumor cells surface glycoproteins are closely related to tumor genesis and development· Metastasis and immune evasion of tumor cells are directly affected by tumor cells surface glycoproteins’over．expression，deletion or structural alterations· In this study,two different methods have been used to isolate the cell surface glycoproteins from LA795 lung cancer cell line．The proteins were then used to synthesize glycoproteins．quantum dots(QDs)conjugates which could，be applied in in vivo imaging observing the interaction between glycoproteins and immune system· Through one method，natural surface glycoproteins which contain glucose or mannose were prepared by affinity chromatography．Through the other method， metabolic labeled glycoproteins were prepared．At first，non。natural monose 1，3，4， 6．O．acetyl．N．azido acetylmannosamine(Ac4ManNAz)was synthesized，to label surface glycoproteins which were then be extracted through click chemistry method． At the same time．QDs fluorescent nanoparticles were