第三章节 基因工程的奇迹资料.pptVIP

T4—DNA连接酶的基本性质 Humulin （优泌林） 重组人胰岛素 1982年10月在美国上市，全球第一个商业化基因重组人胰岛素。 Eli Lilly and Company EcoRI产生的5’粘性末端 PstI产生的3’粘性末端 第二种具有平末端的DNA片段。如EcoRⅤ、PvuⅡ 具有平末端的DNA片段不易于重新环化 ② DNA分子有二种断裂类型 一是具有粘性末端的DNA片段。如EcoRⅠ、 PstⅠ PvuII产生的平头末端 ③ 同位酶、同裂酶、同尾酶 同位酶（isoschizomers ）：来源不同的限制酶可识别相同的DNA序列，但是在序列中切割位置却不同。 如：XmaⅠ CCCGGG SmaⅠ CCCGGG GGGCCC GGGCCC 同裂酶（isoschizomers）：来源不同的限制酶识别同样的核苷酸靶序列，产生同样的切割，形成同样的末端。 如：SstⅠ CCGCGG SacⅠ CCGCGG GGCGCC GGCGCC 同尾酶（isocaudamers）：来源各异，识别的靶子序列也各不相同，但都产生出相同的粘性末端。 常用的限制酶BamHⅠ、BclⅠ、BglⅡ、Sau3AⅠ和XhoⅡ就是一组同尾酶，它们切割DNA之后都形成由GATC 4个核苷酸组成的粘性末端。 限制性核酸内切酶的命名 限制性核酸内切酶由三部分构成，即菌种名、菌系编号、分离顺序。如HindⅢ，前三个字母来自于菌种名称H.influenzae，“d”表示菌系为d型血清型；“Ⅲ”表示分离到的第三个限制酶。 EcoRⅠ---Esoherichia coli R Ⅰ Sac Ⅰ---Streptomyces achromagenes Ⅰ DNA连接酶（DNA ligase）: 能够催化DNA双链上相邻的3’-OH和5’-P共价结合形成3’-5’磷酸二酯键，使原来断开的DNA缺口重新连接起来的酶。 最常用T4—DNA连接酶，来源于T4噬菌体 (2) 修复RNA—DNA杂交双链上缺口处的磷酸二酯键 (3) 连接完全断开的两个平头双链DNA分子 3.5 基因技术的第一次尝试——呱呱落地的细菌 S.Cohen and H.Boyer 1972年，他们共同开创基因技术的第一次实验 TC Kan TC Kan TC 具有双抗性的重组工程菌呱呱落地了 ! “爪蟾-细菌”融合质粒 从中得到的更重要的东西：一种基因工程普遍适用的方法——DNA克隆技术得以发展，它能够制造和分析大量高等生物的遗传材料。 3.6 如何获得基因 为什么真核基因不能在原核细菌中表达？ 原核生物体内不具有对真核生物基因的内含子进行剪切的功能 。 获得基因的方法： a.将mRNA逆转录为cDNA b.化学合成基因，前提是基因的序列已知 逆转录酶（reverse transcriptase） ： 将单链mRNA逆转录为双链cDNA(complementary DNA,互补DNA)的酶。 DNA合成仪 3.7 胰岛素 是由胰腺的胰岛细胞分泌的一种非常重要的小分子激素蛋白。 I型糖尿病：由于胰腺中胰岛细胞被破坏不能产生胰岛素而引起的，又称胰岛素依赖型糖尿病。 II型糖尿病：由于机体的肝脏、肌肉及脂肪细胞等对胰岛素促进葡萄糖的吸收、转化、利用发生了抵抗而导致的。 1953年，美国科学家F.Sanger证实了胰岛素的结构，它是由两条多肽链组成的，其中一条有21个氨基酸，称为A链，另一条有30个氨基酸，称为B链。 F.Sanger（1918~） 人体内胰岛素的合成 人体内胰岛素的合成 35个氨基酸称为C链，它对于胰岛素的空间构象的正确折叠是必需的，能够保证A链和B链在连接时的正确朝向。 24个氨基酸是信号肽，帮助前胰岛素原从内质网进入细胞质中。 猪胰岛素与人胰岛素相比，有一个氨基酸序列的差异，人胰岛素B链的末端是苏氨酸，而猪胰岛素B链末端是丙氨酸。 胰蛋白酶（trypsin）：一种水解酶 a.能够特异水解蛋白质中赖氨酸或者精氨酸旁边的肽段。而猪胰岛素B链末端的丙氨酸恰巧就在赖氨酸后面。 b.在无水环境下可以重组肽链（将其它的氨基酸连接到肽链上）。 20世纪30年代Hoechst公司生产的猪胰岛素产品广告 3.8 第一种基因工程胰岛素的诞生 1982年，美国Eli Lilly公司首先开始利用重组大肠杆菌生产人胰岛素。 A链和B链的基因分别合成 有活性的重组人胰岛素诞生了 * * 第三章 基因工程的奇迹 3.1 DNA双螺旋 DNA—脱氧核