抗血管内皮细胞抗体在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用及其机制探讨-呼吸内科专业毕业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2014 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 抗血管内皮细胞抗体在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用及 其机制探讨 专 业：呼吸内科 研究生：张璐 导 师：张湘燕 教授 【摘要】 目的 探讨抗血管内皮细胞抗体（AECA）在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的 作用以及甲强龙的干预影响。方法：39 只大鼠随机分为正常对照组、吸烟大鼠 肺气肿模型组、甲强龙干预组 10 mg／kg，均 1 次／d。每组各 13 只，模型组及 干预组进行被动吸烟，当烟雾暴露 1 个月时，对干预组皮下注射甲强龙，每隔 1 d，注射 1 次.烟雾暴露 90 d 后，抽取下腔静脉血，处死大鼠，同时收集支气管 肺泡灌洗液（BALF），检测各组大鼠血清 AECA、支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死 因子-α（TNF-α）、白介素-8（IL-8）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）。制作组 织切片做苏木精·伊红染色观察病理形态学改变，测定肺平均内衬间隔隔（MLI）、 平均肺泡数（MAN），并采用大鼠肺组织监测肺泡细胞凋亡及血管内皮生长因子 表达。采用免疫组化法检测大鼠肺组织中 VEGF 及其受体（VEGFR-2）的表达；利 用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记(TUNEL)技术对肺泡隔凋 亡细胞进行检测。结果：（1）与干预组比较，模型组血清 AECA 升高（P0.05）； （2）与模型组比较，干预组 BALF 中 IL-8、TNF-α、MMP-9 浓度均明显降低（P 均0.05）;(3)模型组 MLI 比干预组增高(P0.05)，其 MAN 比干预组降低，差异 有统计学意义(P 0.05)；模型组肺泡隔细胞凋亡指数(AI)高于干预组，差异有 统计学意义(P 0.05)。（4）模型组中 VEGF 及其受体（VEGFR-2）阳性染色面积 呈弱表达，而干预组中 VEGF 及其受体（VEGFR-2）比模型组表达丰富，差异均有 统计学意义(均 P0．05)。结论：1. AECA 与肺气肿大鼠肺泡隔细胞凋亡形成相 关；2.甲强龙可通过降低 AECA 表达抑制肺泡隔细胞凋亡甚至肺气肿形成；3.推 测 AECA 在肺内表达能在 COPD 发病中起到一定的作用。 【关键词】 肺气肿; 甲强龙；抗血管内皮细胞抗体；肿瘤坏死因子－ α; 白细 胞介素－ 8; 基质金属蛋白酶－ 9；VEGF;VEGFR-2 前 言 4慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary disease COPD）是 一种严重危害人类健康的常见病、多发病，病死率较高，并给患者及其家庭以及 社会带来沉重的经济负担。该病是一种以持续气流受限为特征的可以预防和治疗 的疾病，其气流受限多呈进行性发展，与气道和肺组织对烟草烟雾等有害气体或 有害颗粒的慢性炎症反应增强有关。慢阻肺主要累及肺脏，但也可引起全身(或 称肺外)的不良效应。当前，该病发病机制机制尚未完全清楚，治疗效果不尽人 意，慢阻肺患者肺内炎症细胞以肺泡巨噬细胞、中性粒细胞和CD +T细胞为主，激 4 [1] 活的炎症细胞释放多种炎性介质，包括白三烯B4、IL-8、肿瘤坏死因子-α等 ， 越来越多的研究结果表明，自身免疫反应、肺泡隔细胞凋亡在肺气肿甚至COPD 的 形成过程中具有重要的作用，被认为是解释COPD发病的新的机制，因此越来越受 到国内外学者的关注和重视。 血管内皮细胞抗体（AECA）是一组针对血管内皮细胞膜表面结构抗原的异 质性抗体[2]，它可出现在与血管炎有关的多种自身免疫疾病当中。说明该抗体的 产生可能是诱发自身免疫反应的重要因素之一;许多研究表明COPD的形成也和自 身免疫反应有关[3-5]，尤其是有学者还发现在终末期肺气肿病人血清中检测到抗 血管内皮细胞抗体[6] 。故有此可推测，AECA 亦有可能在肺气肿形成中起着重要 作用，而且和疾病严重程度相关。国外Taraseviciene- Stewart等[5]对自身免疫 性肺气肿动物的研究则进一步提示AECA可能和肺气肿形成相关，不仅如此，他们 还发现：伴随AECA的升高，动物机体内基质金属蛋白酶 （MMP-9 、MMP-2）表达 增强，肺泡隔细胞凋亡也明显增加，但VEGFR2表达减弱。结合相关资料：气道炎 症形成、VEGFR2表达减弱均和肺泡隔细胞凋亡甚至肺气肿形成有关[7]，我们推测 AECA对肺气肿的促进作用可能和其促进炎症形成、抑制VEGFR2表达、诱发肺泡隔 细胞凋亡有关。多种伴随有AECA升高的自身免疫性疾病都对皮质类固醇治疗反应 良好。大量的事实证明COPD急性加重期患者在标准治疗的基础上加用糖皮质激素 能够更快地缓解症状、减缓肺功能下降[8]。因此，结合上述相关内容，可进一步 推测：皮质类固醇激素有可能通过抑制AEC