六味地黄丸对大鼠2型糖尿病周围神经病变的干预及机制研究.doc

新诊断标准与分型] 。根据国际糖尿病联盟统计，全球有糖尿病患者达2．3 亿，正在以每年700多万新发患者的速度增长，估计到2025 年将达到3 亿 多人口，截止到2003 年，中国已经成为糖尿病发病第二大国，拥有糖尿病 患者2380 万，预计到2030 年，将突破4320万[朱海清,杨文英] 。其中2 型糖尿病（T2DM）的发病正趋向低龄化，儿童中发病率逐渐升高[李堂,孙 立波]。 2型糖尿病是糖尿病中最常见类型，与生活饮食、遗传、年龄等因 素相关，随着现代人们生活的水平的提高，社会人口老龄化加剧，以及人 们的生活方式的改变，2型的患病人数逐渐增加，患病率呈逐渐增长。目前 2型糖尿病的病因任未研究透彻，但大量的研究发现其病因是复杂的遗传因 素和环境因素共同作用的结果。遗传因素作用机制为：参与发病的各次效 基因分别影响糖代谢有关过程的某一个中间环节增加了易感性，多个基因 总和效应形成了遗传的易感性[贾伟平] 。环境因素包括：年龄、作息、运 动、营养等等，其中营养因素影响最突出，致病机制表现为：糖脂代谢紊 乱所造成的“葡萄糖毒性”和“脂毒性”。在遗传的基础上由体内摄食过 多和运动减少造成的肥胖，引起了一系列代谢变化和细胞因子的异常表达， 出现了胰岛素抵抗，在此诱因基础上再加上各种胰岛细胞自身病变进而又 引起了β细胞功能损害，出现在一系列的代谢紊乱综合症[丁守华,刘东] 。 糖尿病的慢性并发症有很多，其中以糖尿病周围神经病变 ( diabetic peripheral neuropathy,DPN) 最常见，DPN发病率和危害程度都很高[刘硒 碲,夏宁]。目前认为 DPN的发病机制除与高血糖引起的代谢紊乱、微血管病 变[M. Stumvoll]、神经营养因子缺乏、氧化应激损伤有关外,最近发现属于 蛋白激酶 C(PKC)信号转导系统的应激活化蛋白激酶(JNK)和胞外调节蛋白 激酶(ERK) 在细胞信号转导中的激活与 DPN的发生有着密切的关系。其结 果是使神经细胞缺血缺氧以及雪旺氏细胞皱缩，影响神经细胞传导功能[石 敏,李剑波] [宋卫东,侯念宗] 。 中医认为糖尿病属于“消渴”“痹证”“血痹”范畴，病机是因为肝 肾阴虚而有燥渴的表现[中华中医药学会糖尿病分会] [孙凤英] 。近年来 临床对中医药尤其是复方制剂在治疗 DPN 方面进行了大量疗效观察和研 究。被誉为“补阴方药之祖”的六味地黄丸，是治疗肾阴不足的基本方。 六味地黄丸对由肝肾阴虚所致的糖尿病效果显著。随着人们对六味地黄丸 药理作用研究的不断深入，取得了许多新的进展，发现其具有降血压、降 血脂、降血糖、抗氧化等多种药理作用[刘冬恋] [李元,刘垣] 。 本实验以研究六味地黄丸对2-DM大鼠早期胰岛素抵抗模型作为主要研 究对象，采用高脂高糖饲料喂养，低剂量注射STZ诱导大鼠产生胰岛素抵抗， 造模2型糖尿病肥胖伴胰岛素抵抗大鼠模型，比较正常组、糖末宁组、模型 组及六味地黄丸治疗各组用药后大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗 相关指数、自由基指标、醛糖还原酶等的变化，探讨其对二型糖尿病周围 神经病变干预的机制作用研究，进一步深入，寻求治疗的理论依据，既为 六味地黄丸在DPN患者的应用提供药理学依据，又可开发其在临床更广泛的 应用领域。 材料与方法 1 实验材料与仪器 实验动物 SD大鼠，雄性，购自重庆滕鑫比尔实验动物研究所。 试验药物 STZ 美国sigma公司；生产批号：120112 六味地黄丸 宛西制药股份有限公司，生产批号：120142 糖末宁 辽宁奥达制药有限公司，生产批号 2 主要实验试剂 造2型糖尿病模型所用试剂： 胆固醇 上海蓝季科技发展有限公司，生产批号：120920 胆酸钠 上海蓝季科技发展有限公司，生产批号：120920 血生化指标所用试剂 SOD生化试剂盒 南京建成生物工程研究所生产批号：121016 MDA生化试剂盒 南京建成生物工程研究所：121016 AR ELISA试剂盒 AR醛糖还原酶试剂盒 上海卓康生物科技有限公司；批号：2001212； 放免法试剂盒 放免法空腹胰岛素试剂盒碘[125I] 放射免疫法胰岛素分析药盒，由北京普 尔伟业生物科技有限公司生产；批号：201206。 3 主要实验仪器 (1)LDZX-50KB立式电热压力蒸汽消毒器，上海申安医疗器械厂 (2)SW-CJ-1F型单人双面净化工作台，苏州净化设备有限公司 (3)电子天平 FA1604N,0.1mg,上海民桥精密科学仪器有限公司。 (4)罗氏活力型血糖仪（ACCU-CHEK? Active）Ⅰ型，美国罗氏 (5)ACCU-CHEK?公司血糖测试条，条码编(6)10μL、20μL、100μL、1000μL 移液器，德国Eppendo