毕业论文：共转化ZxNHX-VP1-1基因百脉根的分子鉴定及抗逆性评价（课程设计）.docVIP

毕 业 论 文 （本科生） 中文标题 共转化 ZxNHX-VP1-1基因百脉根的分子鉴定及抗逆性评价 英文标题 Molecular identification and tolerance evaluation of ZxVP1-1 and ZxNHX gene in Lotus corniculatus 学生姓名 指导教师 学 院 草地农业科技学院 专 业 草业科学基地班 年 级 兰州大学教务处 精品毕业论文 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u 摘要 1 Abstract 2 前言 3 1 材料与方法 4 1.1 转基因分子检测的材料 4 1.2转基因植株的分子检测 4 1.3转基因植株的RT-PCR检测 4 1.3.1植物总RNA的提取 4 1.3.2 总RNA纯度及浓度检测 5 1.3.3总RNA完整性检测 5 1.3.4 RT-PCR扩增 5 1.4转基因植株的抗逆性检测材料 5 1.5实验处理 5 1.5.1盐胁迫处理 5 1.5.2干旱胁迫处理 6 1.6 测定指标 6 1.7 数据分析 6 2 结果 6 2.1 植物基因组DNA的完整性检测 6 2.2 转基因植株的PCR检测 6 2.3 目的基因在转基因百脉根中表达的RT-PCR分析 7 2.3.1 植物总RNA浓度及纯度检验 7 2.3.2 RT-PCR的分析 8 2.4 ZxNHX-ZxVP共转化百脉根株系具有更强的耐盐性 8 2.5 ZxNHX-ZxVP共转化百脉根株系具有更强的抗旱性 9 2.6 转基因百脉根株系中积累了更多的阳离子 10 2.7 ZxVP和ZxNHX基因的超表达降低了转基因百脉根的叶片渗透势 12 2.8 转基因百脉根株系的叶片具有较高的相对含水量 13 2.9 转基因百脉根株系的细胞膜受损程度显著低于野生型植株 13 2.10 转基因植株的净光合速率高于野生型植株 14 3 讨论 14 4参考文献. 17 5致谢 20 评语 21 共转化ZxNHX-VP1-1基因百脉根的分子鉴定及抗逆性评价 刘允佳 指导老师：王锁民 （兰州大学，草地农业科技学院，730000） 摘要：本文以百脉根品种迈瑞博为实验材料，用根癌农杆菌介导的方法将携带霸王离子区域化基因ZxNHX和ZxVP1-1的双价载体转入百脉根，用PCR及RT-PCR检测得15株共转化百脉根植株，并对转基因植株的进行抗旱性耐盐性检测，结果发现：(一)在干旱和盐胁迫下转基因百脉根生长更快，且耐盐抗旱性显著增强。(二)阳离子含量的测定结果表明：不论在正常生长条件，还是在盐或干旱胁迫下，转基因百脉根比野生型植株在叶和根中积累了更多的Na+、K+和Ca2+。(三)ZxNHX和ZxVP1-1基因的超表达使得转基因百脉根株系的细胞膜受损程度显著低于野生型株系：随着NaCl浓度的增加或干旱胁迫时间的延长，转基因和野生型株系的相对质膜透性均呈增加趋势，但野生植株增加的更快。(四)ZxNHX和ZxVP1-1基因的超表达还可保护转基因百脉根的光合系统。 以上结果说明ZxNHX和ZxVP1-1的超表达促进了转基因百脉根细胞的Na+区域化能力，同时增强了其细胞对其它阳离子的吸收能力。这一方面可以减少盐胁迫下细胞质中过量Na+对各类细胞器和细胞膜的伤害作用，并稳定细胞内的离子平衡；另一方面可将Na+作为一种有益的渗透调节剂来提高细胞的渗透调节能力，使转基因百脉根能在盐或干旱胁迫下保持较多水分并维持细胞膨压，进而提高转基因植株的耐盐抗旱性。 关键词：共转化百脉根 ZxNHX ZxVP1-1 耐盐性 抗旱性  Molecular identification and tolerance evaluation of ZxVP1-1 and ZxNHX gene in Lotus corniculatus Liu Yun-Jia Faculty advisor: Wang Suo-Min College of Pastoral Agriculture Science and Technology，Lanzhou University， Lanzhou，Gansu Province 730000，China Abstract：In this es