沙利度胺对小鼠黑色素瘤生长及血管生成模式的影响-病理学与病理生理学专业论文.docx

天津医科大学硕士研究生学位论文中文摘要 天津医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 目的：分析沙利度胺对黑色素瘤微循环模式形成、肿瘤细胞增殖活性以及肿瘤 侵袭转移相关蛋白表达的影响，阐述沙利度胺抑制黑色素瘤生长相关分子机制， 为临床治疗黑色素瘤提供思路和实验依据。 方法：C57小鼠35只，随机分为实验组和对照组(实验组20只，对照组15 只)，鼠鼷部注射B16黑色素瘤细胞悬液1×106／ml 0．2ml建立荷瘤小鼠模型。 由于沙利度胺水溶性差，将其溶解于O．5％羧甲基纤维素钠(sodium carboxylmethyl cellulose，CMC)溶液中。于接种后第5天开始给药，实验组每日 给予2 00mg／kg沙利度胺0．2 m1灌胃，对照组相同方法给予等量O．5％CMC。持 续1 2天，每天测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，接种后第17天处死全部实验组 和对照组小鼠，剥离肿瘤。将肿瘤组织沿最大面剖开，10％福尔马林固定并进行 HE染色，进行形态学观察。免疫组织化学染色观察药物对MMP-2、MMP-9、 VEGF、NF-K B和PCNA表达的影响。计数方法如下：避开坏死组织，选择有 代表性的10个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，取其阳性细胞均数来 评价整张切片的染色状况。肿瘤微循环模式计数方法如下：随机选择10个高倍 视野，进行内皮依赖性血管、马赛克血管(mosaic vessel，MV)和血管生成拟态 (vasculogenic minficry，VM)计数并取均值，观察沙利度胺对肿瘤微循环的影 响。肿瘤细胞坏死情况的计数方法如下：选择有代表性的10个高倍视野，每个 视野计数100个肿瘤细胞中的坏死细胞数，取坏死细胞均数来计数整张切片的 坏死状况。应用SPSS for Windows 1 0．0统计软件包对数据进行方差分析及t检 验，以P<O．05为有统计学意义标准。 结果：肿瘤生长早期实验组和对照组肿瘤生长体积差异不明显，在肿瘤生长后 期实验组小鼠的肿瘤体积明显小于对照组，两者差异有统计学意义(尺O．05 统计学分析结果表明实验组内皮依赖性血管、马赛克血管和血管生成拟态数目 天津医科大学硕士研究生学位论文与对照组相比显著降低(P<0．05)，且实验组肿瘤组织中VEGF．NF-r．B，PCNA， 天津医科大学硕士研究生学位论文 与对照组相比显著降低(P<0．05)，且实验组肿瘤组织中VEGF．NF-r．B，PCNA， MMP-2及MMP-9的表达也明显低于对照组(P<0．05)．实验组肿瘤组织中出现 较多的坏死，坏死细胞数明显高于对照组(P<0．05)． 结论：沙利度胺可以抑制B16黑色素瘤C57dx鼠移植瘤的生长，其作用机制 主要包括以下两方面：(1)沙利度胺可下调VEGF、NF-r,B，MMP-2及MMP．9的 表达，抑制内皮依赖性血管、马赛克血管和血管生成拟态的生成．VEGF、NF-r．B、 MMP-2及MMP-9均是肿瘤血管生成的诱导因子，促进肿瘤的血管生成。沙利度 胺通过下调VEGF、NF-r,B、MMP一2及MMP一9的表达，可抑制黑色素瘤中内皮依 赖性血管．马赛克血管和血管生成拟态的生成。(2)沙利度胺下调肿瘤细胞PCNA 的表达，抑制黑色素瘤细胞的增殖活性，促进肿瘤细胞的坏死，其机理可能与 氧毒性物质ROS的生成有关．总之，沙利度胺可促进肿瘤细胞坏死，下调VEGF， NF—r,B，MMP一2及MMP一9的表达和肿瘤细胞的增殖活性，抑制内皮依赖性血管、 马赛克血管和血管生成拟态的生成，影响黑色素瘤的血液供应，抑制肿瘤的生 长． 关键词：沙利度胺；黑色素瘤；血管生成拟态；马赛克血管；内皮依赖性血管； NF-1c B Ⅱ 天津医科大学硕士研究生学位论文英文摘要 天津医科大学硕士研究生学位论文 英文摘要 Thaiidomide influence the growth and angiogenesis patterns of melanoma Abstraet OBJECTIVE：The aim of thiS research was to examine the inhibition of thalidomide on the microcirculation patterns and proliferative activity of melanoma in mouse B16 melanoma transplanted tumor model．The effects and primary mechanism of thalidomide on melanoma microcirculation and tumor cel 1 growth WOUld be elucidated．These re