酪丝亮肽抗肝癌作用及对肿瘤细胞内钙稳态影响机制的研究-临床检验诊断学专业论文.docx

中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 目的：观察三肽化合物酪丝亮肽的抗肿瘤作用，初步探讨其可能的作用机制。 方法：建立裸鼠人肝癌BEL．7402移植瘤模型，观察酪丝亮肽对荷瘤裸鼠肿瘤 生长的抑制作用；应用透射电镜研究酪丝亮肽对裸鼠人肝癌BEL．7402移植瘤 细胞超微结构的影响。应用激光扫描共聚焦显微技术，观察酪丝亮肽对体外培 养人肝癌BEL．7402细胞和人正常肝细胞株Chang氏肝胞浆游离钙离子浓度瞬 时变化的影晌：应用流式细胞仪研究酪丝亮肽对体外培养人肝癌BEL一7402细 胞胞浆游离钙离子浓度长时相的影响；应用流式细胞仪分析酪丝亮肽对体外培 养的肿瘤细胞BEL一7402线粒体膜电位的影响；观察酪丝亮肽对BEL一7402细 胞Ca2+_M92十ATP酶活力的影响。应用流式细胞仪、透射电镜及原位末端标记 技术观察酪丝亮肽在体内和体外对肿瘤细胞BEL．7402的促凋亡和坏死作用。 结果；酪丝亮肽能显著抑制人肝癌BEL．7402裸鼠移植瘤的生长，80I．tg／kg／a、 16099／kg／d和320pg詹∥d给药帮量组的肿瘤生长抑制率分别为，21．66％、 34．78％和41．34％，电镜观察发现酪丝亮肽可引起移植瘤细胞的坏死和凋亡， 细胞器线粒体和内质网损伤，并出现钙沉积。 激光扫描共聚焦显微镜与流式细胞仅观察表明，酪丝亮肽可引起体外培养 BEL．7402细胞胞浆钙离子浓度在短时间内大幅升高，10“卧nl药物在400s内 引起胞浆钙离子升高的最高幅度可达239．13％，酪丝亮肽持续作用lhr后胞浆 钙离子维持在高水平，作用2hrs后胞浆钙离子浓度开始下降，4hrs和24hrs 时的胞浆钙离子水平均低于对照(P<0．05)，l[．tg／ml与10p．g／ml酪丝亮肽对于 BEL一7402细胞胞浆钙离子的影响有相同的变化趋势，相同剂量的药物对人正 常肝细胞株Chang氏肝无明显影响；酪丝亮肽可影响BEL．7402细胞线粒体跨 膜电位，药物作用lhr后线粒体跨膜电位无明显变化，作用2hrs后膜电位开 始下降，作用4hrs和24hrs时的线粒体跨膜电位明显低于对照rP<0．05)；10¨g／ml 酪丝壳肽作用24hrs对BEL-7402细胞Ca2+一MgZ+ATP酶括力无明显影响。 酪丝亮肽在体内对裸鼠人肝癌BEL-7402移植瘤细胞有较明显的促凋亡作 2 中文摘要用，各药物剂量组瘤细胞凋亡率均高于生理盐水组(P<O．05)；酪丝亮肽可以 中文摘要 用，各药物剂量组瘤细胞凋亡率均高于生理盐水组(P<O．05)；酪丝亮肽可以 使裸鼠人肝癌BEL一7402移植瘤TUNEL阳性(凋亡)细胞明显增多。109∥ml 酪丝亮肽体外作用于BEL．7402细胞，凋亡率可达18．23％，明显高于对照 (P<0．05)；超微结构研究显示酪丝亮肽体外可引起BEL一7402细胞坏死和凋 亡，胞浆明显肿胀、水肿，线粒体和粗面内质网崩解，扩张的内质网中有散在 的钙颗粒。 结论：酪丝亮肽对裸鼠人肝癌BEL．7402移植瘤生长有明确的抑制作用，能影 响体外培养BEL．7402细胞胞浆钙离子水平，损伤肿瘤细胞线粒体，在体内和 体外均可引起BEL．7402细胞发生坏死和凋亡。 关键词：酪丝亮肽； 人肝癌BEL一7402； 胞内游离钙； 线粒体膜电位 AbstraclAbstract Abstracl Abstract Objective：To research the anticancer effect of polypeptides tyroserleutide human hepatocarcinoma BEL一7402 and to investigate its possible mechanism by affecting calcium homeostasis oftumor cell． Methods：The animal model of human hepatocarcinoma BEL一7402 transplanted in nude is established to observe anticancer effect of tyroserleutide；the electron microscopy is used to investigate effect of tyroserleutide ultrastructure of human hepatocarcinoma BEL一7402 transplanted in nude mice；applying confocal laser scanning mieroscope(CLSM)to investigate transient effect of tyroserleutide ca