毕业论文：共振光瑞利散射用于分析表面活性剂与酶蛋白的相互作用研究论文（课程设计）.docVIP

共振光瑞利（Rayleigh）散射用于分析表面活性剂与酶蛋白的相互作用研究 1. 1光散射现象 光散射作为一种自然现象已长期为人们熟知，例如天空是蔚蓝色的、晚霞是红色的，又如在暗室里将一束强光射过溶液，在光的垂直方向上观察，可以清楚地看到明显的光径等[1]。这些现象都与光被空气中的灰尘、烟雾等微粒散射有关。光散射现象是指光通过介质时在入射光方向以外的各个方向上所观察到的现象。 1.2散射光的产生 光散射现象是电磁辐射与介质相互作用的一种表现形式。光波是一种电磁波，当光照射在某一粒子上时，若粒子的直径小于光的波长，则光波激发粒子以入射光的频率作简谐运动振动。振动的偶极子相当于次级光源向空间发射的电磁波，这就是散射光源。如果介质是光学不均匀的，分散相与分散介质折光指数相差较大，则产生的诱导偶极矩不同或者因分子热运动引起密度或浓度的局部涨落，使折光指数或介电常数发生局部变化，这两种情况散射光源所产生的次级辐射波不能抵消，就会出现光散射现象[2]。光的散射与介质的不均匀性密切相关，除了真空之外的其它所有介质都有一定程度的不均匀性，从而产生散射光，只是由于介质中粒子大小不同，产生不同种类的散射。Tyndall在1869年发现一束会聚的光通过溶胶时，则从侧面可以看到一个发光的圆锥体，即Tyndall效应。1871年，Rayleigh提出了著名的Rayleigh散射定律，用电磁波理论解释了小质点光散射的本质[3]。 1.3光散射类型 根据散射辐射频率与入射辐射频率的关系将散射分为弹性散射、非弹性散射和准弹性散射[4]。 (l)弹性散射(Elasticscattering):指散射光波长与入射光波长相等的散射，在散射中没有频率位移、无能量损失，又称为经典散射或静态散射。d≤20λ0的Rayleigh散射、浑浊介质的Tyndall散射和透明介质的分子散射都是弹性散射。 (2)非弹性散射(Inelastieseattering):是指散射光波长不等于入射光波长的散射,在散射中有频率位移、有能量损失。拉曼散射、布里渊散射属于非弹性散射。发射光波长与入射光波长不同的Raman散射是光与分子振动交换能量的非弹性散射，而Brillouin散射是由于热声波引起的非弹性散射。其中拉曼散射是现在研究最深入，使用最广泛的光散射。 (3)准弹性散射(Quasi-elastic light scatering)是指散射光波长与入射光波长有微小差别的散射，是由于散射质点不停的作Brown运动所引起的多普勒(Doppler)效应使散射光频率以入射光频率为中心而展宽，即动态光散射射。根据介质中粒子大小不同，散射可分为Tyndall散射和分子散射。当粒子的尺寸大于入射光波长(λ0)时发生反射和折射并服从光的反射和折射定律。如果介质中粒子直径(d)与入射光波长相近，便产生Tyndall散射，这是由非均相分散体系中的悬浮粒子所产生的光散射，如光与乳状液、悬浮液和胶体溶液作用时发生的光散射；如果介质中粒子很小，如d≤20λ0时便产生以Rayleigh散射为主的分子散射[4]，分子散射一般要比Tyndall散射弱得多。 1.4共振光散射技术的概述 Rayleigh散射研究发展130多年以来，已建立了较完善的理论体系，并在化学、物理、生物、天文学以及气象学上得到广泛的应用。利用Rayleigh散射可以测定蛋白质、DNA等生物大分子和高分子化合物的相对分子量的大小[5]。对大气Rayleigh－Mie散射光进行光谱分析，可获取大气温度、气溶胶含量和风速等大气信息[6]。Rayleigh散射还可用于测量团簇尺寸[7]。利用激光与流场中分子的Rayleigh散射，可测定分子流场的分子密度、流速和温度等物理参数[8]。尽管Rayleigh散射技术已得到广泛应用，但该技术信号水平低，一般仅有入射光的千分之一左右，因此必须使用昂贵的激光光源和灵敏的检测器。作为分析手段而言，Rayleigh散射选择性不是很好。不同物质的Rayleigh散射光强度与入射波长的关系均遵守I∝1/λ4的Rayleigh散射定律，没有特征峰，因而限制了它的应用。若在Rayleigh散射实验中，选择入射光波长接近待测物质的吸收带时，Rayleigh散射会大大增强，而且会出现新的散射特征峰。这主要是散射与吸收的共振作用，产生了一个吸收-再散射过程，从而使散射光强度提高几个数量级。这种吸收-再散射的过程称为共振Rayleigh散射或者共振光散射[9]。与物理上广泛使用的散射光谱法不同的是，共振光散射光谱法不用激光作为光源，只需要普通荧光分光光度计，调节激发光波长和发射光波长相等，即可测定待测组分发出的共振光散射强度。大量实验表明，共振光散射强度与共振光散射分子的浓度有线性关系，据此可直接进行定量分析。共振光散射光谱法是一种十