反胶团萃取与双水相萃取.pptVIP

LOGO 制药分离工程 主讲：程纯儒 第五章 反胶团萃取与双水相萃取 反胶团萃取 双水相萃取 2 1 反胶团萃取 技术发展背景： 随着生物工程的发展，传统的溶剂萃取方法难以应用于一些 生物活性物质（如蛋白质）的提取和分离。急需研究和开发 易于工业化的、高效的生化物质分离方法。 反胶团萃取（reversed micellar extraction) P72页英文单词错误。 反胶团萃取 1977年，瑞士学者Luisi等人首次提出用反胶团萃取蛋白质， 但并未引起人们的广泛注意。 20世纪80年代，生物学家们才开始认识到反胶团萃取的重 要性。 反胶团萃取 胶团（micelles): 将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界胶团浓度时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起形成聚集体，称为胶团。 水溶液中胶团的非极性基团在内，而极性基团在外。 反胶团（reversed micelles): 将表面活性剂溶于有机溶剂中，当其浓度超过临界胶团浓度时，表面活性剂就会在有机溶液中聚集在一起形成聚集体，称为反胶团。 有机溶液中胶团的非极性基团在外，而极性基团在内。 反胶团萃取 在反胶团中，极性基团排列在内，形成一个极性核，溶解水后，就形成“水池”，起保护作用，使蛋白质不失活。 反胶团萃取 常用的表面活性剂： 阴离子表面活性剂：丁二酸-2-乙基己基酯磺酸钠 阳离子表面活性剂：溴化十六烷基三甲胺，溴化十二烷基二甲胺，氯化三辛基甲胺 反胶团萃取 丁二酸-2-乙基己基酯磺酸钠 丁二酸-2-乙基己基酯磺酸钠（AOT),最常用，原因： 易于获得 具有双链，极性基团小，形成反胶团时，不需要加入助表面活性剂 形成的反胶团半径较大，有利于大分子蛋白的进入 反胶团萃取 反胶团的形状和大小 反胶团的形状多为球形或近似球形，有时也呈柱状结构。 半径：一般10-100nm, 取决于盐的种类和浓度、溶剂、表面活性剂的种类和浓度以及温度。 W0=[水]/[表面活性剂] 反胶团萃取 水池的性质： 水池提供亲水微环境，可溶解氨基酸、肽、蛋白质等。 当含水率较低时，“水池”内水的理化性质相差悬殊。 W0小于6-8时， 池中水的表观黏度上升50倍，疏水性也极高。 由于有较高的电荷浓度，“水池”中水的pH值不同于主体的pH。 反胶团萃取 反胶团萃取蛋白质的过程： 蛋白质进入反胶团溶液是一种协同过程。 表面活性剂同临近蛋白质发生静电作用而变形---》在两相界面形成反胶团----》扩散到有机相中。----》改变pH,离子种类、强度等，可使蛋白质由有机相重新返回水相，实现反萃取过程。 反胶团萃取 蛋白质溶入反胶团的推动力： 1.静电作用力（最直接的因素是pH值,与等电点PI）。 2.空间位阻效应（水池的大小和形状）。 反胶团萃取 影响反胶团萃取蛋白质的主要因素： 与反胶团有关的因素：表面活性剂种类、浓度， 有机溶剂种类，助表面活性剂及其浓度 与水相有关的因素：pH值，离子的种类，离子的强度 与目标蛋白质有关因素：蛋白质的等电点、大小、浓度、表面电荷分布 与环境有关的因素：系统的温度、压力 双水相萃取 双水相系统：因两种水溶性聚合物的水溶液，或一种水溶性聚合物水溶液与盐溶液混合时的不相容性而形成有明显界面的两相系统 特点：两相均含有大量的水（高达80%以上）， 界面张力小，一般只有0.5-10-4mN/m， 萃取环境和条件温和， 生物相容性好，有时有稳定作用； 分配系数可控：聚合物修饰、相系统组成、 操作条件容易放大，几百倍。 双水相萃取 发展历史 1896年荷兰微生物学家Berjerinck发现琼脂水溶液与可溶性淀粉或明胶水溶液混合时形成双水相现象。 1956年瑞典lund大学的Albertsson教授及其同事开始对双水相系统进行比较系统研究。测定了许多双水相系统的相图，考察了蛋白质、核酸、病毒、细胞及细胞颗粒在双水相中的分配行为，为双水相萃取系统的发展奠定了基础。只局限于实验室内的测定和理论研究。 双水相萃取 发展历史 Kula教授研究小组对双水相的应用、工艺流程、操作参数、工程设备、成本分析等进行了大量研究，在应用上获得成功。1978年首先将双水相萃取技术用于酶的大规模分离纯化，建成了一套工业装置，达到20kg/h的处理能力，分离纯化了几十种酶，也应用于基因工程产品的分离。 双水相萃取可分离多肽、蛋白质、酶、核酸、病毒、细胞、细胞器、细胞组织，以及重金属离子等，近年来，还应用于一些小分子，如抗生素、氨基酸和植物的有效成分等的分离纯化。作为反应系统用于酶反应，生物转化，发酵的产物生产与分离的集成。 双水相萃取 1.双水相系统含较高浓度的水溶性聚合物和盐，会带到产物中，去