冷冻消融对前列腺癌细胞转化生长因子-β及smad通路影响的实验研究-临床医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于  不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 研究目的 中文摘要 冷冻消融治疗在美国已成为局限期前列腺癌的一线治疗方法之一，转移性 前列腺癌的局部治疗目前是一研究热点，备受关注。在冷冻消融治疗过程中， 在最大限度消灭肿瘤的同时又要保护正常组织，很难保证所有癌组织都能达到 致死温度，而是形成亚致死区（sublethal district）。冷冻消融后残存肿瘤细胞及 肿瘤微环境与肿瘤的复发、转移密切相关。TGF-β 与肿瘤的侵袭、转移、上皮间 质转化以及肿瘤免疫等关系密切，我们前期研究发现，冷冻消融后血浆 TGF-β 发生变化，提示其在前列腺癌微环境中可能发挥一定作用。为此，本研究体外 实验模拟冷冻后不同微环境中细胞状态，在细胞水平探讨冷冻对 CWR-22RV1 前列腺癌细胞系中 TGF-β1 的释放变化、细胞内 TGF-β1 及 smads 蛋白表达水平 的影响,并在此基础上进一步探讨 TGF-β 阻断对冷冻后前列腺癌细胞侵袭、迁移 力影响。 研究内容 TGF-β 与肿瘤的侵袭、转移、上皮间质转化以及肿瘤免疫等关系密切，本实 验模拟前列腺癌冷冻消融治疗后亚致死细胞对不同微环境的反应，探讨冷冻后 亚致死细胞 TGF-β 的释放变化以及冷冻后瘤体内细胞 TGF-β1 及下游信号因子如 smad2、smad3、smad4 蛋白表达水平变化，同时探讨冷冻与 TGF-β 中和抗体对 冷冻后前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。 研究方法 在本实验中，将细胞分为 A，B，C，D 四组。A 组为未处理细胞，为对照 组细胞。B 组为实验组，经-80℃冻融（-80℃环境中冷冻 7 分钟）处理，模拟亚 致死细胞。C 组为实验组，未处理前列腺癌细胞培养液中加入坏死液（将前列腺 癌细胞悬液放入液氮罐中冷冻 4 分钟，37℃复温后离心取上清，得到坏死液）。 D 组为实验组，为亚致死细胞的培养液中加入坏死液。流式细胞术检测细胞凋亡 变化，酶联免疫吸附试验测定对照组及实验组细胞培养 5 小时、10 小时、20 小 时、36 小时、48 小时上清液中 TGF-β1 浓度，研究各组 TGF-β1 的释放变化；采 用蛋白质免疫印迹法测定细胞培养 10 小时四组细胞内 TGF-β1、smad2、smad3、 smad4 蛋白的表达水平，探讨冷冻后 TGF-β1、smad2、smad3、smad4 蛋白表达 水平变化；同时 Transwell 实验中增加 E 组（在 D 组基础上添加 TGF-β 中和抗 I 体）检测冷冻与 TGF-β 阻断对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。 研究结果 1.实验组 B 组细胞凋亡率较对照组 A 组增加（21.83±1.03 vs 11.2±1.57， P0.05），实验组 D 组细胞凋亡率较实验组 B 组增加（29.50±0.52 vs 21.83± 1.03，P0.05）。 .实验组与对照组细胞上清液中 TGF-β1 浓度的时间变化趋势大致一致：上 清液中 TGF-β1 浓度从 5 小时到 36 小时处于持续上升趋势，36 小时达高峰之后 下降。细胞释放的 TGF-β1 浓度实验组 D 组高于对照组 A 组，实验组 B 组低于 对照组 A 组（P 0.05）。 .细胞培养 10 小时细胞内 TGF-β1、smad2、smad3、smad4 蛋白表达水平： 实验组 D 组 TGF-β1、smad2、smad3、smad4 表达水平高于对照组 A 组，实验 组 B 组 TGF-β1、smad2、smad3、smad4 表达水平低于对照组 A 组。 4. Transwell 侵袭实验的结果显示 A 组、B 组、C 组、D 组、E 组的穿膜细 胞数为：89±1.2 vs 65±2.8 vs 115±4.6 vs 132±3.1 vs 48±4.7，P 0.0